Контекст исследования

Астма - это гетерогенное заболевание, характеризующееся хроническим воспалением дыхательных путей, высокой реактивностью и чрезмерной секрецией слизи, у более чем 300 миллионов пациентов. Традиционная точка зрения заключается в том, что клетки Th2 и их цитокины 2 типа являются основными факторами, но все больше клинических и животных доказательств предполагают, что имманентные лимфоциты типа 2 (ILC2), присущие иммунизированной группе легких, могут быстро выделять IL - 5, IL - 13 без адаптивного иммунитета, усиливая инфильтрацию эозинофильных гранулоцитов с кубикуляризацией, которая становится « воспламенителем» приступов астмы. В то же время макрофаги типа M2 иммунных клеток с высокой долей в легких значительно увеличились при стимуляции аллергенами, и было доказано, что они могут переносить активные молекулы для межклеточной регуляции, но M2EV по - прежнему остается пустым, если и как регулировать функцию ILC2. Уточнение этого встроенного механизма внутрииммунного диалога обещает открыть новые терапевтические цели, которые не зависят от Т / В - клеток.

Результаты исследований

Разделение и идентификация M2EV

Дифференциальная гиперцентрифуга в сочетании с TEM, NTA и WB подтвердила, что легочная ткань у мышей с астмой OVA богата пузырьками диаметром 115 нм, классическими признаками EV и отрицательными белками внутренней сетки; Потоковые и qPCR далее показывают, что эти высокоэкспрессивные макрофаги M2, характерные молекулы CD206 и Arg - 1, показывают, что они в основном происходят из макрофагов M2.

Эксперимент по ингибированию GW4869

Ингибитор nSmase2 GW4869 значительно снижает выработку ЛЭВ в легких, синхронно снижает количество ILC2, индекс размножения Ki67 и уровни IL - 5 / IL - 13 в клетках, также значительно уменьшается инфильтрация цитокинов 2 типа и эозинофильных гранулоцитов в BALF, а защитный эффект согласуется с Rag1 / - мышами, что указывает на то, что M2EV активирует ILC2 независимо от Т / B - клеток.

Очистка макрофагов и обратная передача M2EV

После удаления гиперфага легких из глифосата липидов (CL) доля и функция ILC2 снижается; Последующая очистка дыхательных путей от M2EV восстанавливает количество ILC2, выделение IL - 5 / IL - 13 и повторно усиливает воспаление легочной ткани и образование слизи, доказывая, что M2EV является ключевой средой для поддержания функции ILC2.

Механизм поглощения M2EV ILC2

PKH26 маркер M2EV после введения через дыхательные пути, с общей фокусировкой и потоковой индикацией проглоченных флуоресцентных пузырьков в легких ILC2; Эксперименты с ингибированием in vitro показали, что этот процесс зависит от внутриклеточного проглатывания сеточного белка, опосредованного динамином, проглатывания в небольших гнездах / липидных плотах и приема больших молекулярных клеток.

Косвенное воздействие M2EV на макрофаги и CD4 + Т - клетки

M2EV получает 21,5% макрофагов легких и 9% CD4 + T - клеток; Ретроспективный M2EV значительно увеличивает макрофаг M2 и соотношение Th2 в легких, а в сочетании с улучшением функции ILC2, экстракорпоральная культура также подтверждает, что M2EV способствует макрофагоидной поляризации M2 и усиливает фенотип Th2, предполагая косвенное усиление реакции ILC2 через сторонние клетки.

Отбор и проверка lncRNA4930474H06Rik

RNA - seq идентифицирует 762 lncRNA, выраженные в различиях между M0 - EV и M2 - EV; Комбинация экспрессивной плотности, сохранения видов и связанного с астмой гена DACT1 блокирует высокоэкспрессированную энциклопедию antisense lncRNA 4930474H06Rik, которая значительно обогащена как M2EV, так и астматическими легочными тканями.

Функциональный анализ ингибирования in vitro 4930474H06Rik

После удара Smart silencer по низкому макрофагу 4930474H06Rik способность M2EV индуцировать пролиферацию ILC2, секрецию IL - 5 / IL - 13 и экспрессию белка GATA3 значительно снизилась; В то же время повышение экспрессии гликолазы ILC2 и ECAR указывает на то, что lncRNA поддерживает функцию ILC2 типа 2 путем ингибирования гликолиза.

Противовоспалительные эффекты внутренних вмешательств 4930474H06Rik

После получения « 4930474H06Rik» M2EV у мышей, страдающих астмой, воспаление вокруг бронхов, гиперплазия чашечных клеток, уровни BALF IL - 13 и количество эозинофильных гранулоцитов в легких значительно снизились, а макрофаг легких уменьшился, а M1 увеличился, что подтверждает, что нацеливание на эту lncRNA блокирует ось M2EV - ILC2 и облегчает аллергическое воспаление дыхательных путей.

Выводы

Это исследование показывает, что макрофаги M2 легких прямо и косвенно активируют аллергическое воспаление дыхательных путей, вызванное ILC2, через внеклеточные капсулы, и подтверждает, что incRNA 4930474H06Rik является ключевой активной молекулой этого межклеточного диалога. Ингибирование 4930474H06Rik ослабляет функцию ILC2, снижает секрецию цитокинов 2 типа и значительно облегчает астматическое заболевание, предоставляя новые идеи и экспериментальную основу для точного вмешательства при астме, нацеленного на « иммунизацию - пузырьки - lncRNA».

LvK, ZhangY, YinG, LiX, ZhongM, ZhuX, PeiW. Внешние клеточные заболевания, полученные из длинной группы M2 макрофагов, внутренней или функционной амфоидной клетки, аллергического воспаления. ExpMolMed.2025Июнь; 57(6):1202-1215.doi:10.1038/s12276-025-01465-6.Epub2025Jun2.PMID:40451928; PMCID: PMC12229531.