Клеточное крашение AFDye 555 NHS ester

Эфир AFDye 555 NHS

(Эквивалент эстера Алекса Флуор 555 NHS)

Информация о продукте

описание продукта

AFDye 555 - водорастворимый, светоустойчивый краситель с очень высокой производительностью фотонов. AFDye 555 - оранжевый флуоресцентный краситель, который может быть активирован с помощью лазерного спектра 488 нм или 532 нм. Является альтернативой Cy3 или тетраметилордамину, оптическая стабильность в живых и стационарных клетках лучше, чем Cy3. Сильная толерантность в диапазоне pH 4 - 10.

AFDye555 NHS ester (Equivalent toAlexa Fluor 555 NHS ester) - аминовый, оранжево - люминесцентный краситель, который обычно маркирует белки или антитела, полипептиды, модифицированные на основе амина олигонуклеотиды и другие аминокислоты. Этот маркер обычно эффективен в диапазоне pH 7 - 9 zui, образуя стабильные и ковалентные амидные связи.

Характеристики продукции

Способы хранения и транспортировки

Сохранение: - 20ºC Светоизоляция сухое сохранение, действительное в течение 2 лет.

Перевозка: перевозка мешками со льдом.

Меры предосторожности

1) Флуоресцентные красители имеют проблемы с закалкой, пожалуйста, обратите внимание, насколько это возможно, чтобы избежать света, чтобы замедлить закалку флуоресценции.

2) Хотя красители серии AFDye NHS ester обладают определенной растворимостью в воде, настоятельно рекомендуется использовать раствор DMSO и DMF для получения материнской жидкости, а затем провести последующие эксперименты по маркировке. Потому что в водорастворимых системах эти реактивные группы очень подвержены гидролизу, чтобы генерировать неактивные формы свободных кислот.

3) Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, наденьте лабораторный костюм и используйте одноразовые перчатки.

I. Этапы окрашивания (например, маркировка иммуноглобулина IgG)

Почти все белки или полипептиды могут быть помечены реагентами на амины (зондами). Ниже приведены шаги маркировки, оптимизированные для антител IgG, которые пользователи могут увеличить или уменьшить реакционную систему в зависимости от количества собственного белка, но для получения желаемого результата окрашивания концентрация белка не должна быть менее 2 мг / мл. Поскольку аминокислоты, содержащиеся в различных белках (полипептидах), и расположение аминокислот на поверхности сильно различаются, рекомендуется, чтобы пользователи установили три различных набора реагентов на амины во время первого эксперимента: морби белка для отбора морби, которое может достичь эффективности маркера zuijia.

1.1 Полное растворение ~ 10 мг белка в 1 мл 0,1 м углеродного суланового гидронатриевого буфера.

Примечание ①:: Концентрация белка обычно составляет 5 - 20 мг / мл, а успешность сцепления сильно зависит от концентрации белка. Когда концентрация ниже 2 мг / мл, это может серьезно повлиять на эффективность маркировки.

ПРИМЕЧАНИЕ:: Система маркировки должна предотвращать любые аминосодержащие субстраты, такие как трис, глицин, аммоний или другие стабильные белки, такие как BSA, например, загрязнение, содержащее эти вещества в маркированном белковом растворе, путем диализа до 10 - 20 мм фосфатного буфера (PBS) и добавления 0,1 мл 1 м карбонатного буфера (pH 8.3 - 9,0) на мл белкового раствора до требуемого уровня pH.

Примечание 3:: Низкие концентрации азида натрия (< 3 мМ) или сульфата ртути (< 1 мМ) в растворе антитела не мешают маркировочной реакции.

1.2 Растворить аминореактивы (зонды) в высококачественных безводных DMF или DMSO (например, AFDye555 NHS ester) до 10 мг / мл.

Примечание (1): Водный раствор AFDye 488 NHS ester должен быть доступен и не может быть сохранен, так как в водном растворе он гидролизуется в неактивную свободную кислоту. Жидкость для хранения DMSO в AFDye 488 NHS ester может храниться при температуре - 20°C и рекомендуется использовать в течение 2 недель.

1.3 При смешивании или растворе вихревого белка медленно добавляется реагент реакции 50 - 100 мкл (зонд).

Примечание ①: Количество добавок реагентов аминовой реакции (зондов) составляет 0,5 - 1 мг, и в целом около 1 / 4 - 1 / 3 реагентов аминовой реакции соединяются с белками. Эффект маркировки различных белков и маркирующих реагентов различен, оптимизируйте соотношение между ними в зависимости от конкретного случая.

1.4 Медленное перемешивание при комнатной температуре, чтобы избежать света инкубации 1h (или более).

1.5 [необязательно] прекращение реакции путем добавления 0,1 мл свежеприготовленного гидроксиламина 1.5M (pH 8.5), инкубация системы, содержащей гидроксиламин 1h при комнатной температуре.

1.6 Очищение: Выберите подходящий способ (например, диализ, столбец P - 30 или столбик PD - 10) для очистки маркировочного продукта и удаления ионов соли или реактивов, не реагирующих на амин.

1.7 Хранение: хорошо маркированный протеин светонепроницаемый сохраняется при 2–8 °C. Если очищенные белковые соединения имеют концентрацию < 1 мг / мл, добавьте BSA или другие стабильные белки 1 - 10 мг / мл. При наличии 2 мм азота натрия 2 - 8°С могут сохраняться в течение нескольких месяцев. Если требуется более длительное хранение, после раздельной сборки необходимо избежать сохранения света при температуре 20°C, чтобы избежать повторного замораживания и таяния.

II. Расчет доли маркировки (значение F / P)

Для большинства антител, таких как иммуноглобулин IgG, коэффициент поглощения моля составляет 203 000, а значение F / P - от 4 до 9.
2.1 Расчет значения F / P маркированного белка AFDye555:
1) небольшое количество очищенного ассоциированного белка, разбавленного с помощью точного кратного PBS, измеряется поглощением света 280 нм и 555 нм в 1 см колориметрической чашке;
2) Расчет концентрации белка в образце: концентрация белка моль = (A280 - (A555×0,08) x кратное разбавлению / 203000
3) Расчетное соотношение маркеров: молярное число красителей на молярный белок = A555×разбавленное кратное / (Молярная концентрация белка 150000×)

сопутствующие товары

Written / Edited by V. Shallan (Авторские права принадлежат MKbio Pason Kang)

Shanghai Maocang Biotechnology Co., Ltd. - это работа по реагентам, приборам и лабораторным расходным материалам и экспериментальным услугам, связанным с исследованиями в области биологических наук и биотехнологий, в основном занимается клеточной биологией, ботаникой, молекулярной биологией, иммунологией, биохимией и протеомикой. Биофармацевтика и диагностические реактивы НИОКР производство и тд. Наша компания придерживается бизнес - концепции « ориентированный на людей, искренний как доверие, соблюдение контракта». Придерживайтесь принципа « гарантии качества» для предоставления качественных продуктов широкому кругу клиентов.