Клеточное крашение AFDye 647 NHS ester

эфир AFDye 647 NHS

(Эквивалент эстера Alexa Fluor 647 NHS)

Информация о продукте

описание продукта

Dye 647 - водорастворимый, светоустойчивый краситель с очень высокой производительностью фотонов. AFDye 647 - это яркий флуоресцентный краситель дальнего инфракрасного диапазона, который может быть активирован с помощью лазерных линий спектра 633 нм или 647 нм. Подходит для визуализации мишеней с низкой плотностью залегания, особенно в стационарных клетках. Сильная толерантность в диапазоне pH 4 - 10.

AFDye647 NHS ester (Equivalent toAlexa Fluor 647 NHS ester) - аминовый реагирующий, флуоресцентный краситель дальнего инфракрасного диапазона, обычно маркирующий белки или антитела, полипептиды, модифицированные на основе амина олигонуклеотиды и другие аминокислоты. Этот маркер обычно эффективен в диапазоне pH 7 - 9 zui, образуя стабильные и ковалентные амидные связи.

Характеристики продукции

Способы хранения и транспортировки

Сохранение: - 20ºC Светоизоляция сухое сохранение, действительное в течение 2 лет.

Перевозка: перевозка мешками со льдом.

Меры предосторожности

1) Флуоресцентные красители имеют проблемы с закалкой, пожалуйста, обратите внимание, насколько это возможно, чтобы избежать света, чтобы замедлить закалку флуоресценции.

2) Хотя красители серии AFDye NHS ester обладают определенной растворимостью в воде, настоятельно рекомендуется использовать раствор DMSO и DMF для получения материнской жидкости, а затем провести последующие эксперименты по маркировке. Потому что в водорастворимых системах эти реактивные группы очень подвержены гидролизу, чтобы генерировать неактивные формы свободных кислот.

3) Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, наденьте лабораторный костюм и используйте одноразовые перчатки.

I. Этапы окрашивания (например, маркировка иммуноглобулина IgG)

Почти все белки или полипептиды могут быть помечены реагентами на амины (зондами). Ниже приведены шаги маркировки, оптимизированные для антител IgG, которые пользователи могут увеличить или уменьшить реакционную систему в зависимости от количества собственного белка, но для получения желаемого результата окрашивания концентрация белка не должна быть менее 2 мг / мл. Поскольку аминокислоты, содержащиеся в различных белках (полипептидах), и расположение аминокислот на поверхности сильно различаются, рекомендуется, чтобы пользователи установили три различных набора реагентов на амины во время первого эксперимента: морби белка для отбора морби, которое может достичь эффективности маркера zuijia.

1.1 Полное растворение ~ 10 мг белка в 1 мл 0,1 м углеродного суланового гидронатриевого буфера.

Примечание ①: Концентрация белка обычно составляет 5 - 20 мг / мл, а успешность сцепления сильно зависит от концентрации белка. Когда концентрация ниже 2 мг / мл, это может серьезно повлиять на эффективность маркировки.

Примечание 2: Система маркировки должна предотвращать любые аминосодержащие субстраты, такие как трис, глицин, аммониевая соль или другие стабильные белки, такие как BSA, в случае загрязнения, содержащего эти вещества в маркированном белковом растворе, требуется диализ до 10 - 20 мм фосфатного буфера (PBS) и добавление 0,1 мл 1 м карбонатного буфера (pH 8.3 - 9,0) в каждый мл белкового раствора до требуемого уровня pH.

ПРИМЕЧАНИЕ (3): Низкие концентрации азида натрия (< 3 мМ) или сульфата ртути (< 1 мМ) в растворе антитела не мешают реакции маркера.

1.2 Растворить аминореактивы (зонды) с высоким качеством безводных DMF или DMSO (например, AFDye647 NHS ester) до 10 мг / мл.

Примечание (1): Водный раствор AFDye 488 NHS ester должен быть доступен и не может быть сохранен, так как в водном растворе он гидролизуется в неактивную свободную кислоту. Жидкость для хранения DMSO в AFDye 488 NHS ester может храниться при температуре - 20°C и рекомендуется использовать в течение 2 недель.

1.3 При смешивании или растворе вихревого белка медленно добавляется реагент реакции 50 - 100 мкл (зонд).

Примечание ①: Количество добавок реагентов аминовой реакции (зондов) составляет 0,5 - 1 мг, и в целом около 1 / 4 - 1 / 3 реагентов аминовой реакции соединяются с белками. Эффект маркировки различных белков и маркирующих реагентов различен, оптимизируйте соотношение между ними в зависимости от конкретного случая.

1.4 Медленное перемешивание при комнатной температуре, чтобы избежать света инкубации 1h (или более).

1.5 [необязательно] прекращение реакции путем добавления 0,1 мл свежеприготовленного гидроксиламина 1.5M (pH 8.5), инкубация системы, содержащей гидроксиламин 1h при комнатной температуре.

1.6 Очищение: Выберите подходящий способ (например, диализ, столбец P - 30 или столбик PD - 10) для очистки маркировочного продукта и удаления ионов соли или реактивов, не реагирующих на амин.

1.7 Хранение: хорошо маркированный протеин светонепроницаемый сохраняется при 2–8 °C. Если очищенные белковые соединения имеют концентрацию < 1 мг / мл, добавьте BSA или другие стабильные белки 1 - 10 мг / мл. При наличии 2 мм азота натрия 2 - 8°С могут сохраняться в течение нескольких месяцев. Если требуется более длительное хранение, после раздельной сборки необходимо избежать сохранения света при температуре 20°C, чтобы избежать повторного замораживания и таяния.

II. Расчет доли маркировки (значение F / P)

Для большинства антител, таких как иммуноглобулин IgG, коэффициент поглощения моля составляет 203 000, а значение F / P - от 4 до 9.
2.1 Расчет значения F / P маркированного белка AFDye647:
1) разбавление небольшого количества очищенного ассоциированного белка с точным кратным PBS для измерения поглощения света 280 нм и 650 нм в 1 см колориметрической чашке;
2) Расчет концентрации белка в образце: концентрация белка моль = (A280 - (A650×0,03) x кратное разбавлению / 203000
3) Расчетное соотношение маркеров: молярное число красителей на молярный белок = A650×разбавленное кратное / (концентрация моля белка 239000×)

сопутствующие товары

Written / Edited by V. Shallan (Авторские права принадлежат MKbio Pason Kang)

Shanghai Maocang Biotechnology Co., Ltd. - это работа по реагентам, приборам и лабораторным расходным материалам и экспериментальным услугам, связанным с исследованиями в области биологических наук и биотехнологий, в основном занимается клеточной биологией, ботаникой, молекулярной биологией, иммунологией, биохимией и протеомикой. Биофармацевтика и диагностические реактивы НИОКР производство и тд. Наша компания придерживается бизнес - концепции « ориентированный на людей, искренний как доверие, соблюдение контракта». Придерживайтесь принципа « гарантии качества» для предоставления качественных продуктов широкому кругу клиентов.