клонирование и экспрессивный анализ агробактерий

EHA105(pSoup) Электрокомпетентная клетка

Агробактериальные транссенсорные клетки

Маркировка продукции:

штамм EHA105; агробактериальные сенсорные клетки; Рифампицин (Риф) Лифупин; Канамицин (кан) канамеин; EHA101； LBA4404； GV3101； AGL1； Генетические исследования растений;

Заказ продукции:Большие проблемы с упаковкой или технологией продукта,

Описание продукта:

Штамма EHA105 была модифицирована штаммом EHA101, хромосомный фон C58, ядерный ген содержит метку скрининга - Lifuping resolitive gen rif, чтобы облегчить конверсию, этот штамм несет янтарную щелочную Ti - плазмидную гранулу pEHA105 (pTiBo542DT - DNA), которая не имеет собственной функции транзита, которая содержит ген вира (ген вира является необходимым компонентом для вставки T - ДНК в геном растений, а pEHA105 (pTiBo542DT - DT - DNA) плазмидная функция переноса T - ДНК сама по себе была нарушена, но может помочь в плавной передаче бинарного носителя ДНК). Перенос плазмиды help в штамм EHA105: pSoup, то есть получить: штамм EHA105 (pSoup), который помогает репликации плазмиды семейства pGreen, 62SK, pGs2 в агробактерии, в то же время придавая этому штамму резистентность к тетрациклину (tetR), подходит для трансгенных операций растений, таких как рис и табак.

EHA105 (pSoup) электротрансцептивные клетки, предоставляемые нашим отделом (Paocang Biological), изготовлены с помощью специальных процессов и особенно подходят для преобразования крупных плазмид. Генотип C58 (rifR) Ti pEHA105 (pSoup) (pTiBo542DT - DNA) Succinamopine (pSoup - tetr), эффективность преобразования которого была проверена плазмидами pGs2 > 105cfu / мкг ДНК.

Компоненты продукции:

Условия хранения и транспортировки:

Сохранить: - 80°C Сохранить, 1 год действителен.

Транспорт: перевозка сухого льда.

Меры предосторожности

1) Почувствительные клетки должны храниться при температуре - 80°C, не могут быть повторно заморожены, расплавлены и размещены слишком долго, чтобы не снижать эффективность преобразования сенсорных клеток.

2) Вся операция преобразования выполняется строго в соответствии с требованиями соответствующей температуры и стерильных условий.

3) Объем добавляемой плазмиды не должен превышать 1 / 10 объема чувственного состояния. Нечистые плазмиды или загрязнение органическими веществами, такими как этанол, могут привести к резкому снижению эффективности преобразования. плазмиды удваиваются, а эффективность преобразования снижается на порядок.

4) Для обеспечения высокой эффективности преобразования Zui весь процесс работы должен быть максимально мягким и поддерживать низкую температуру.

5) Преобразование высококонцентрированных плазмид может соответствующим образом уменьшить конечное количество покрытий.

6) Когда плотность клонирования на планшете слишком велика, клонированный рост замедляется, а колония уменьшается из - за недоедания. Для получения макрофауны следует сократить использование плазмиды.

7) Лифупин добавляется в питательную среду для предотвращения роста бактерий и скрининга агробактерий; Добавление цепного мейцина или циндамеина в зависимости от резистентности используемого штамма предотвращает потерю Ti - плазмиды, но Цепной мей не способствует ГМО - манипуляции агробактерий, которые обычно культивируются без учета Циндамэйина или Циндамэйина, поскольку вероятность потери Ti - плазмиды крайне низка (в основном можно игнорировать)

8) Для вашей безопасности и здоровья, пожалуйста, наденьте лабораторный костюм и используйте одноразовые перчатки.

способ применения

1) Извлечь электрошоковый стакан 0,1 см и крышку стакана из жидкости для хранения в течение 5 мин на чистой всасывающей бумаге, ожидая, что он высохнет влагу, установите 5 мин, так что этанол полностью испаряется и чист, сразу же вставьте в лед, уплотните поверхность льда, верхняя часть стакана электрода 0,5 см от поверхности льда, чтобы облегчить крышку стакана, лед статически помещается на 5 мин, чтобы полностью охладить его.

2) Возьмите чувствительные клетки, сохраненные при - 80°C, и вставьте их в лед на 5 мин, пока они не расплавятся.

3) Добавьте 0,01 - 1 мкг плазмидной ДНК (объем не более 6 мкл) в суспензию 50 мкл чувственных клеток, перемешайте ее с помощью ручного bo на дне трубки и немедленно вставьте в лед. После мягкого дутья пистолетом, чтобы перемешать чувствительные клетки - плазмиды быстро перемещаются в электрошоковую чашку, прикрывая крышку чашки, воздушная трубка остается полезной [Примечание: из - за высокой эффективности преобразования сенсорного состояния di использует zuihao для предварительного испытания, чтобы определить количество плазмиды zuijia за один раз].

4) Включите электротрансформатор, установите параметры: C = 25 мкF, PC = 200 ohm, V = 2400 В (этот параметр ссылается на Bio - rad, в частности, используйте рекомендуемые шаги электротрансформатора для работы), электрошоковый стакан быстро помещается в трансформатор, электрический шок завершается быстрой вставкой в лед.

5) Добавьте 700 мкл LB без антибиотиков и переместите в сенсорную воздушную трубку, культивируя 2 ~ 3 ч при колебаниях 28°C.

6) 6000 rpm центрифуга 1 мин, оставляя около 100 ul верхней очистки, а затем мягко дует в тяжелую суспензию пистолетом. Затем добавьте к пластинам LB или YEB, содержащим соответствующие антибиотики, и аккуратно раскройте клетки стерильными стеклянными палочками. Комнатная температура устанавливается на 10 мин, после того, как жидкость всасывается, перевернутая пластина, 28°C культивируется в течение 2 - 3 дней. [Примечание: когда пластина содержит только антибиотики с двойным вектором, используемые для преобразования, 28°C достаточно культивировать 48ч; Когда в планшет добавляют антибиотики с двойным носителем в то же время, добавьте 10 мкг / млифу обычно, необходимо 28°C культивировать 48 - 60 ч; Когда в планшет добавляют антибиотики с двойным носителем в то же время, добавляя 20 мкг / млифу обычно, требуется 28°C культивировать 60 - 72 ч; не рекомендуется использовать более 20 мкг / мл Лифупина для плоских или жидких культур.

7) Цель клонирования жидкой культуры:

j Небольшое количество колеблющихся бактерий: 1 мл жидкой питательной среды LB, содержащей соответствующие антибиотики, добавляется в воздухопроницаемую пробирку с круглым дном 15 мл, 1 - 2 одноклеточные прививки отбираются из свежевыращенной пластины, 30°C, 200rpm колеблющиеся бактерии 24 - 48h.

k Большое количество колеблющихся бактерий: 100 мл воздухопроницаемого треугольника добавьте менее 20 мл жидкой питательной среды LB, содержащей соответствующие антибиотики, возьмите небольшой встряхивающий раствор в пропорции 2%, 30 ° C, 200 rpm колеблющиеся бактерии 24 - 48 h.

[Примечание]: Для агробактерий (аэробных бактерий), как твердых пластин, так и жидких колеблющихся бактерий, требуется много кислорода. Ключом к успеху жидких колеблющихся бактерий является обеспечение того, чтобы питательная среда содержала достаточное количество растворенного кислорода, которое можно контролировать следующим образом: j с помощью воздухопроницаемых пробирок или треугольных бутылок; k) обеспечить, чтобы питательная жидкость имела большое поперечное сечение и небольшую толщину; Антибиотики добавляются как можно меньше или не добавляются, антибиотики должны быть добавлены в минимальной концентрации.

Связанные продукты (серия сенсорных клеток)

Таблица 1 Составы твердой и жидкой среды LB

Таблица 2 Составы твердой и жидкой среды YEB

Таблица 3 Сводная информация о восприимчивости распространенных агробактерий к антибиотикам

Written / Edited by V. Shallan (Авторские права принадлежат MKbio Pason Kang)

Shanghai Maocang Biotechnology Co., Ltd. - это работа по реагентам, приборам и лабораторным расходным материалам и экспериментальным услугам, связанным с исследованиями в области биологических наук и биотехнологий, в основном занимается клеточной биологией, ботаникой, молекулярной биологией, иммунологией, биохимией и протеомикой. Биофармацевтика и диагностические реактивы НИОКР производство и тд. Наша компания придерживается бизнес - концепции « ориентированный на людей, искренний как доверие, соблюдение контракта». Придерживайтесь принципа « гарантии качества» для предоставления качественных продуктов широкому кругу клиентов.