TRZOL (Общий РНК - экстракционный реагент)

TRZOL (Общий РНК - экстракционный реагент)

Презентация продукции:

Реактор TRZOL - это реагент, который извлекает общую РНК непосредственно из клетки или ткани. Он сохраняет целостность РНК при дроблении и растворении клеток. После добавления хлороформа в центрифугу образцы были разделены на водный и органический слои. РНК присутствует в водном слое. После сбора проб воды выше РНК может быть переработана путем осаждения изопропилового спирта.

Независимо от того, являются ли они тканями человека, животных, растений или бактерий, этот метод лучше отделяет небольшое количество и большое количество тканей и клеток. Оперативная простота реактива TRZOL позволяет обрабатывать несколько образцов одновременно. Все операции могут быть выполнены в течение часа. Общая РНК, экстрагированная TRZOL, предотвращает загрязнение ДНК и белков. Это позволяет проводить анализ отпечатков РНК, скрещивание пятен, отбор poly (A) +, транскрипцию in vitro, анализ защиты РНК - ферментов и молекулярное клонирование.

Реактор TRZOL способствует выделению нескольких РНК разных размеров. Например, РНК, извлеченная из печени крысы, была электрофореза агаридным гелем и окрашена бромидом этилена, и было видно много полос с высокой молекулярной массой (мРНК и компоненты hnRNA) между 7 и 15 кб, два доминирующих рибосома ~ 5 кб (28S) и ~ 2 кб (18S), а РНК с низкой молекулярной массой находилась между 0,1 и 0,3 кб (tRNA, 5S). Когда извлеченная РНК разбавляется TE, ее отношение A 260 / A 280 ≥ 1,8.

Хранение продукта: TRZOL стабильно сохраняется при комнатной температуре в течение 12 месяцев. Тем не менее, для достижения хорошего эффекта мы рекомендуем хранить в среде 2–8 °C. (Подробно об операции см. инструкцию)

Шаблон DNA: Реакция PCR требует шаблонной ДНК, такой как извлечение ДНК из клеток, тканей, крови и т. Д.

ii. экстракт: два экстракта реакции PCR, каждый в паре с двумя концами шаблонной ДНК для определенных областей, необходимых для расширения, экстракт также может быть синтезирован в экстракт, используемый в процессе клонирования TA;

iii. dNTPs: четыре типа dNTPs необходимы в реакции PCR, включая дезоксиаденозин (dATP), дезоксиденатурат (dCTP), дезоксиптидин (dGTP), дезоксицитозин (dTTP), для биологических процессов, таких как деление клеток, синтез ДНК, для расширения и расширения шаблонной цепочки ДНК с расширением PCR;

iv. Taq DNA - полимераза: полимераза, необходимая для реакции PCR, обычно с использованием Taq - полимеразы, и некоторые другие виды полимеразы, такие как ПФУ, Phusion и т. Д. Для расширения цепочек ДНК;

v. раствор PCR buffer: обладает буферным действием на реакцию PCR, регулирует pH реакции, SDS сульфата серы, малые молекулярные органические соединения, такие как формальдегид, может повысить специфичность реакции PCR, тем самым повышая эффективность реакции;

В - шестых, энзимная система: амплификация PCR часто включает в себя экспериментальные шаги, такие как рекомбинация, построение и секвенирование, и часто требует ферментативной операции.

VII. MARK: стандарт молекулярной массы, инструмент для определения размера фрагментов ДНК.

viii. Наборы для очистки ДНК: для очистки продуктов реакции PCR;

Голая каша; низкая концентрация DT
При выборе Oligo dT требуется, чтобы РНК имела Poly A, поэтому мРНК эукариотических организмов применимы. RT, подходящий для длинных цепочек и даже длинных мРНК, имеет более высокие требования к качеству образцов РНК без явного загрязнения ДНК, разложения РНК и разрушения РНК. Если вы хотите исследовать новую мРНК для реакции RT, рекомендуется использовать экстракт Oligo dT. Использование Oligo dT - экстрактов лучше, чем стабильность случайных и специфических экстрактов.
Случайные цитаты
RT подходит для различных РНК, особенно для тех случаев, когда плотность шаблона низкая (например, когда экспрессия гена низкая). При выборе случайного экстракта цепная реакция синтеза cDNA состоит из всех РНК в качестве шаблонов, а затем при реакции PCR проектируется экстракт для специфичного расширения. В то же время, обращая внимание на взаимосвязь между количеством случайных экстрактов и общим количеством РНК, рекомендуется, чтобы количество случайных экстрактов на 5 мкг общей РНК составляло 50 нг, и если количество случайных экстрактов на 5 мкг общей РНК превышает 250 нг, это может привести к увеличению количества мелких фрагментов (< 500 bp) и снижению длины фрагментов и полноты продукта.
Специфические экстракты
Генетически специфические экстракты (GSP) являются частью генетической последовательности, которая дополняет шаблоны. Этот экстракт должен быть спроектирован в сочетании с известными последовательностями целевой РНК. Благодаря сочетанию экстрактов и специфичности последовательности РНК, каждая целевая РНК нуждается в новом наборе генетически специфических экстрактов. Поэтому при анализе нескольких целей необходимо применять больше образцов РНК. Кроме того, температура отжига разных экстрактов по своей сути различна, поэтому обычно не рекомендуется использовать. При необходимости использования специальных экстрактов рекомендуется оптимизировать температуру отжига.