293 HEK - 293 (зародышевые клетки почек человека)

293 HEK - 293 (зародышевые клетки почек человека)

Не называй.Гектор 293; HEK - 293; Поздравления 293; Герц: 293; 293; 293 га; Человеческая эмбриональная почка 293

Программа культивирования A (по умолчанию)

Растительная среда:

MEM (улучшение ATCC) + 10% FBS + 1% P / S

Условия воспитания:

Газовая фаза: воздух, 95%; CO2， 5%, температура: 37°C

Меры предосторожностиКлетка свободно прикреплена к стенке, пожалуйста, работайте как можно более мягко; При обмене жидкости необходимо подогреть питательную среду; В случае получения больших обломков выпадающих клеточных скоплений, как нормальное явление, пожалуйста, следуйте мерам предосторожности при получении.

Ссылки (источники литературы)

Предыстория описывает вечные клетки, образованные клетками зародышевой почки человека, трансформированными вырезанным аденовирусом человека 5 (Ad5), которые содержат и экспрессируют трансформированный ген Ad5. Ранее сообщалось, что геном содержит ДНК на левом и правом концах генома аденовируса 5 (Ad5), но теперь ясно, что ДНК существует только на левом конце. После клонирования точки вставки Ad5 было обнаружено, что 1 - 4344 - битные линейные нуклеотиды Ad5 интегрированы в хромосому 19 (19q13.2). Для расширенных хозяев аденовирусных векторов человека рецепторы клеточной поверхности, которые могут экспрессировать аномальные боулиновые белки, состоят из субъединиц синтеза β1 и субъединиц α - v рецепторов боулина.

Возраст (пол)Плод

Источник организацииПочки; Преобразование ДНК аденовируса 5.

Тип клеткиПреобразовательная клеточная система

Класс биобезопасностиБСЛ-2

Время удвоения~ 24-30 часов

онкогенностьДа, формирует опухоли у голых мышей.

экспрессия рецепторавитронектин

ХранительATCC; CRL-1573 ATCC: PTA-4488 DSMZ: ACC-305 ECACC: 85120602

Клеточная обработка:

1) Реанимация замороженных клеток: замороженные трубки, содержащие 1 мл клеточной суспензии, быстро размораживаются и размораживаются в водяной ванне при температуре 37°C, добавляются в центробежные трубки, содержащие 4 - 6 мл питательной среды. Центрифугирование 3 - 5 мин в условиях 1000RPM, сбрасывание верхней жидкости, питательная среда тяжелых суспензий клеток. Затем клеточную суспензию добавляют в культурную бутылку (или чашку Петри) с 6 - 8 мл питательной среды с культурой 37°C на ночь. На следующий день под микроскопом наблюдался рост и плотность клеток.

2) Клеточная передача: если плотность клеток достигает 70% - 90%, можно проводить культуру передачи. Клетки представляют собой суспензионные и слегка прикрепленные к стенке клетки, которые могут быть переданы со ссылкой на следующие методы:

Сбор: Сбор взвешенных клеток в бутылке для культивирования в центрифужную трубку. Промыть клетки PBS без ионов кальция и магния 1 - 2 раза. Поскольку клетки плохо прикрепляются к стенкам, клетки после промывки PBS выпадают, поэтому PBS также перерабатывается в центробежные трубки.

2. Добавьте 0,25% (w / v) 0,53 мм EDTA в культурную бутылку (T25 1 - 2 мл, T75 2 - 3 мл), помещенную в инкубатор 37°C для переваривания в течение 1 - 2 минут (трудно перевариваемые клетки могут надлежащим образом продлить время переваривания), затем наблюдайте пищеварение клетки под микроскопом, если большая часть клетки округлится и выпадает быстро обратно на стол, после нескольких ударов по бутылке добавьте 3 - 4 мл питательной среды, содержащей 10% FBS, чтобы прекратить пищеварение.

3. Собранные суспензионные клетки, клетки в очищающем растворе pbs и переваренные клетки стенки в 1000 rpml центрифуг 5 мин, отбросить верхнюю очистку, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после повторной суспензии, чтобы перемешать, клеточная суспензия делится на новую бутылку T25 в соотношении 1: 2, добавить 6 - 8 мл в соответствии с требованиями инструкции конфигурации новой среды для поддержания жизнеспособности роста клеток, последующая передача в соответствии с реальной ситуацией в соотношении 1: 2 - 1: 5.

3) Замораживание клеток: после получения клетки рекомендуется заморозить партию клеточных семян при культивировании первых трех поколений для последующего экспериментального использования. Ниже приведен пример T25:

Во время замораживания клетки собирают переваренные клетки в центрифужную трубку в соответствии с процессом клеточной передачи, и для определения плотности замораживания клетки можно использовать счет гемоглобины. Рекомендуемая плотность замерзания для обычных клеток составляет 1×10 ⁶ ~ 1×10 ⁷ живых клеток / мл.

2, 1000rpm центрифуга 3 - 5 мин, удалить выше очистки. Используйте приготовленную клеточную рефрижераторную жидкость для повторной суспензии клеток, в соответствии с 1 мл замороженной жидкости, содержащей 1 × 10 ⁶ ~ 1 × 10 ⁷ живых клеток / мл, выделенных в замороженную трубку, чтобы распределить клетки в замороженную трубку, отметить имя, алгебру, дату и другую информацию.

3) Поместите замороженные клетки в программный охлаждающий бокс и проведите ночь в холодильнике с температурой 80 градусов, а затем переведите в контейнер с жидким азотом для хранения. В то же время для последующего поиска и использования регистрируется местонахождение криогенных труб в контейнерах с жидким азотом.

Этапы работы:

Шаг 1: Извлечь из холодильника непрограммированную замороженную жидкость без сыворотки

Шаг 2: Центробежный сбор клеток логарифмического периода роста (стенные клетки перевариваются центрифугой, суспензионные клетки непосредственно центробежны, скорость 1200 rpm или 250 г, время 3 мин.)

Шаг 3: Бросьте очищение, добавьте соответствующее количество непрограммированной замороженной жидкости без сыворотки, тяжелых суспензий

Шаг 4: В соответствии с количеством 1 ~ 1.5 мл / труб в криогенную трубку, затяните крышку трубки, сделайте маркировку

Шаг 5: Поместите трубку замораживания непосредственно в холодильник с температурой 80°C, а через 24 часа - в жидкий азот для долгосрочного хранения

При отсутствии морозильной камеры или непрограммной заморозки можно выбрать ручной градиент охлаждения. Но ручное градиентное охлаждение не подходит для всех клеток, и эффект нестабилен, и для этого также необходимо сначала пройти тест на замораживание.

Внимание:

1. После получения клетки, если вы обнаружите, что сухой лед испарился чистым, крышка бутылки замороженной трубки выпала, повреждена и клетка загрязнена, пожалуйста, немедленно свяжитесь с нами.

Полученная клетка сначала не открывает крышку бутылки, тело бутылки вытирает алкоголь и помещает его в инкубатор, чтобы статически оставаться в течение 2 - 4 часов (в зависимости от плотности клетки), чтобы стабилизировать состояние клетки. Затем под инвертированным микроскопом наблюдался рост клеток, а клетки фотографировались в различных кратностях (рекомендуется фотографировать общий внешний вид клеток, когда они собираются, чтобы увидеть цвет питательной среды и наличие утечки, а затем под микроскопом - состояние клеток, 100 *, 200 *, по одному), чтобы увидеть, были ли клетки загрязнены во время транспортировки. В качестве основы для осуществления продаж.

3. Поскольку клеточное состояние зависит от многих факторов, таких как окружающая среда, эксплуатация и транспортировка, компания гарантирует только клеточное состояние клиента в течение недели после получения клетки, поэтому клиенту необходимо представить доказательство времени получения клетки после продажи и доказательство времени, предоставленное клиентом для получения и общения с клиентом после обнаружения проблемы, интервал не может превышать 7 дней.

Все клетки животных считаются потенциально биологически опасными и должны работать на платформе биобезопасности второго уровня, и обратите внимание на защиту, все отходы и сосуды, подвергшиеся воздействию этой клетки, должны быть стерилизованы, прежде чем они могут быть выброшены.
Продукция, которую компания продает:

Клетки костной мышцы мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки - предшественники микроглии у мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки - предшественники глии у крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Кровавые стволовые клетки костного мозга мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Хрящевые клетки трахеи крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Волокнистые клетки десен у мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Лимфоциты периферической крови крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки гладких мышц кишечника мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки кровеносных гладких мышц сонной артерии крысы5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Папиллярные клетки меха мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Эмбриональные стволовые клетки крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки мыши Пукено5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Стволовые клетки спинного мозга крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Эмбриональные стволовые клетки мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки тройничных нейронов крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Микрокровеносные периферические клетки сетчатки глаза мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Стволовые клетки зубного мозга крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Отдельные клетки костного мозга мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Волокнистые клетки пениса крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки тройничных нейронов мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки обонятельных клеток крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Волокнистые клетки влагалища мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Хрящевые клетки тазобедренной впадины крысы5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

293 HEK - 293 (зародышевые клетки почек человека) Клетки икроножной мышцы мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки крысы Пукено5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Клетки склероза мышей5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25

Эмбриональные стволовые клетки крыс5×10 ⁵ Культурные бутылки Cells / T25