Человеческий NEL - подобный белок 2 (NELL2) рекомбинантный белок

человекNel - подобный белок 2 (NELL2) рекомбинантный белок

Название продукта:Nel - подобный белок 2 (NELL2) рекомбинантный белок

Английское название:Рекомбинантный NEL-подобный белок 2 (NELL2)

НРП2; Белок, связанный с Nel 2; Белок, связывающий белок с белковой киназой NELL2

модель:CS-D011

Ферменты и киназы

Виды:Homo sapiens (Человек, человек)

Источник: первичное ядерное выражение

ХозяинЭ. Коли

Уровень эндотоксина:< 1.0EU / мкг (определение методом LAL)

Субклеточное позиционирование:н/а

Прогнозируемая молекулярная масса:34,4 кДа

Фактическая молекулярная масса:34kDa (анализ разницы см. в инструкции)

Фрагменты и метки:Pro64~Lys331 с

Компонент буфера: фосфатный буфер (pH7.4， Содержит 0,01% SKL, 1 мм DTT, 5% Trehalose и Proclin300.

Характеристика: замороженный сухой порошок

Чистота:> 90%

Электрическая точка:8.1

Применение:позитивный контроль; иммуноген; SDS-PAGE; ВБ.

спецификация10 мкг 50 мкг 200 мкг 1 мг 5 мг

1. Извлечение тканевых белков

1) Требуемое оборудование: машина для производства льда, маркировочная ручка, два комплекта трубки объемом 1,5 мл EP (высокотемпературная и высоковольтная обработка), большая коробка для льда, коробка для трубки объемом 1,5 мл EP, перчатки, офтальмологические ножницы (высокотемпературная и высоковольтная обработка), свежие ткани или сохраненные в холодильнике с температурой - 80 °C, PBS (обработка при высокой температуре и высоком давлении) в холодильнике с температурой 4°C, всасывающая головка (высокотемпературная и высоковольтная обработка), два комплекта шлифовальных стержней (высокотемпературная и высоковольтная обработка), ладонная центрифуга, фильтровальная бумага, раствор для дезактивации, фенилсульфоновая кислота (PMСтакан, буфер верхнего образца геля 2×SDS, дисульфирол (DTT), генератор, пенопласт.

a. Ледяной механизм производства льда;

b. маркировочная ручка маркирует два комплекта EP - труб;

c. установка на лед коробки с соевым льдом, коробки с трубкой EP, одна маркировочная ручка, помеченная трубкой EP, помещена в коробку с большим льдом, другая маркировочная ручка, помеченная трубкой EP, помещена в коробку с трубкой EP, надета в перчатки, с коробкой с трубкой EP, офтальмологические ножницы вырезают размер соевых бобов (около 100 мг), свежие ткани или хранятся в ткани холодильника с температурой 80°C;

d. удалить PBS, хранящийся в холодильнике 4°C, капать в трубку EP плюс 1 мл PBS, ткань офтальмологической резки (быстрое действие), центробежность на ладони, отбросить, а затем капать в трубку EP плюс 1 мл PBS, измельчить абразивный стержень, 3000 вращающихся центрифуг в течение 10 минут, отбросить очищение, фильтрующая бумага высасывает остаточную жидкость в отверстии, насколько это возможно, оценить объем осадков в трубке EP, вышеуказанные шаги работают на льду;

e. извлечение из холодильника 4°C раствора для третичного дезактивационного крекинга, извлечение PMSF из холодильника 20°C для помещения в большую ледяную коробку, капание в трубку EP с осадком в 3 - 5 раз объёма третичного крекинга (обычно в 5 раз), затем добавление PMSF (соотношение 94: 6), измельчение абразивного стержня (полное крекинг на льду 20 - 30 минут), все вышеуказанные шаги должны быть выполнены;

f. предварительное охлаждение центрифуги, после полного расщепления тканевой жидкости 4°C, 10000 вращения центрифуги в течение 10 минут;

g. промыть стакан проточной водой, залить его одним паром и довести до кипения на электрической печи;

h. Приготовьте гель 2×SDS плюс образец буфера (хранится при комнатной температуре), удалите DTT, хранящийся в холодильнике - 20°C, поместите его в большую ледяную коробку, центробежная верхняя жидкость количественно всасывается в другой набор EP - труб с помощью дренажной пушки (не всасывать осадок нижнего слоя), нажмите на очищающую жидкость: 2×SDS: DTT = 1: 0.8: 0.2 в 2×SDS и DTT, затем аккуратно вставьте трубку EP в пенообразную пластину и подайте ее в кипящую чашку в течение 6 - 8 минут (мощность печи не настраивается слишком сильно, чтобы избежать взрыва крышки трубки);

i. Удалите пенопласт пинцетом, охладите его в большой ледяной коробке в течение 10 минут, центрифугируйте ладонь и положите в холодильник с температурой 20°C для хранения в резерве.

Примечание: Крекинг также может быть выбран, когда это уместно, с одним дезактивационным крекингом или клеточным крекингом.

Экстракция клеточного белка стенки (содержание клеточного белка обычно составляет около 1x10 - 9mg / клетка)

1) Требуемое оборудование: ледогенератор, клеточный скребок, маркировочная ручка, два комплекта трубки объемом 1,5мл EP (высокотемпературная и высоковольтная обработка), две большие ледяные коробки, перчатки, инкубаторы с длинными клетками, PBS, хранящиеся в холодильнике с температурой 4°C, тридезактивационный крекинг, фенилметилсульфонат фтора (PMSF, ингибитор протеазы, высокотемпературная обработка), всасывающая головка (высокотемпературная и высоковольтная обработка), фильтровальная бумага, центрифуга, стакан, буфер на геле 4×SDS, дисульфонат (DTT), пеноматериал.