3T3 - L1 (эмбриональные фибробласты мышей)

Способы сохранения клеток:

(i) Замораживание клеток

Приготовление замороженных питательных растворов, содержащих 10% DMSO или глицерина, 10 - 20% сыворотки телят;

Взять логарифмическую фазу роста клеток, удалить старую питательную жидкость и промыть с помощью PBS.

Удалите PBS и добавьте соответствующее количество (покрывающее поверхность чашки Петри), чтобы переварить клетки, выращенные в одном слое;

Центрифуга 1000 rpm, 5 мин;

5. Удаление, добавление соответствующего количества приготовленной замороженной питательной жидкости, мягкое дутье соломинкой, чтобы сделать клетку равномерной, подсчет, регулировка конечной плотности клеток в замороженной жидкости 5×106 / мл ~ 1×107 / мл;

6. Размещение клеток в замороженные трубки по 1 - 1,5 мл на трубку;

7. Укажите название клетки, время замораживания и оператора на трубке замораживания;

8. Замораживание: стандартная процедура замораживания составляет скорость охлаждения - 1 - 2°С / мин; При температуре ниже - 25°C она может быть увеличена до - 5°C ~ - 10°C / мин; При температуре до - 100°C можно быстро погрузиться в жидкий азот. Замораживающие трубки, содержащие клетки, также могут быть помещены в холодильник с температурой 20 ° C в течение 2 ч, а затем помещены в холодильник с температурой 70 ° C на ночь, извлечены из них и помещены в контейнер с жидким азотом.

Информация о продукции:

Презентация товаров:

Этапы работы:

1) Замена половины или полного количества питательной среды за 24 - 48 часов до замораживания приводит к экспоненциальному росту клеток.

2) Приготовить замороженно - консервативный раствор (приготовленный перед использованием): Возьмите еще одну центробежную трубку, добавьте питательную среду, сыворотку, добавьте диметилсульфоны (DMSO) по капле до 20% концентрации, то есть сделайте двойной замороженный раствор, помещенный при комнатной температуре для использования.

3) Центробежный сбор культивируемых клеток, повторное подвешивание клеток с помощью сывороточной питательной среды, взятие небольшого количества клеточной суспензии (около 0. 1 мл) Подсчитайте концентрацию клеток и выживаемость до замерзания.

4) Взять равное количество замороженной жидкости с клеточной суспензией, медленно по капле добавить клеточную суспензию и встряхнуть пробирку, чтобы сделать клеточную суспензию замораживания (концентрация после DMSO от 5 до 10%), так что клеточная концентрация от 1 до 5 × 106cells / ml, смешанная равномерно, распределенная в маркированной криогенной трубке, 1 - 2 мл / vial, и взять небольшое количество клеточной суспензии для обнаружения загрязнения. После плотного запечатывания укажите название клетки, алгебру, дату. Затем производится замораживание.

Внимание:

1) Клетки, предназначенные для замораживания и сохранения, должны быть в состоянии хорошего роста и высокой выживаемости, около 80 - 90% плотности. Перед замораживанием необходимо проверить, сохранила ли клетка свои свойства, а за один - два дня до замораживания проверить наличие антител.

2) Клетки могут быть заморожены в жидком азоте в течение длительного времени, не влияя на жизнеспособность клеток; При 70 градусах можно хранить несколько месяцев.

3) Обратите внимание на качество хладагентов. DMSO должен быть классом реактива, стерильным и бесцветным (0. 22micron FGLP Telflon фильтрует или покупает стерильные продукты напрямую, такие как Sigma D - 2650, в небольших объемах от 5 до 10 мл, при 4°C, чтобы избежать сохранения света, без многократного размораживания. Glycerol также должен быть классом реагента, который должен быть защищен от света после стерилизации паром высокого давления. Применяется в течение года после включения, так как после длительного хранения токсично для клеток. Этот метод начинается с двойного замораживания жидкости, чтобы избежать повреждения клеток от тепла, выделяемого при непосредственном присоединении DMSO. Медленное добавление капель в клеточную суспензию позволяет клеткам постепенно адаптироваться к высокому просачиванию, уменьшая повреждение клеток. ДМС может вызвать дифференциацию некоторых штаммов лейкемии, которые могут быть заменены 10% глицерином для замораживания.

Продукция, которую компания продает: