АКР - клетки

Название продукта:АКР - клетки

АКР - клеткиОбработка после

Клетки, выращенные в бутылках с культурой в хорошем состоянии, заполнены питательной жидкостью и запечатаны в бутылках - это способ транспортировки клеток. Получив клетку обратно в свою лабораторию, откройте внешнюю упаковку и используйте75% алкоголь распыляет всю бутылку для дезинфекции и помещает в ультрачистую станцию, строго стерильную работу，статическая установка инкубатора2 - 4 часа. Подзеркальное наблюдение: не превышаетПри конвергенции 80% питательный раствор в бутылке может бытьСбор в центрифугуВ середине, присоединение6 мл питательной среды, помещенной37Культивирование инкубаторов °C, 5% CO2; При более чем 80 - процентной конвергенции, в зависимости от ситуации передачи или замораживания, конкретные действия см. шаги клеточной культуры.（Обратите внимание на отправку герметичной бутылки для культивирования, помещенной в коробку для культивирования помните, что крышка бутылки для культивирования отвинчивается, после передачи рекомендуется бутылка с питательной средой внутри оригинальной бутылки, а другая бутылка с собственной питательной средой)

АКР Раковые клетки пищевода у мышейЭтапы воспитания

I. СОДЕРЖАНИЕРеанимационные клетки: СодержитЗамораживающая трубка для клеточной суспензии 1 мл быстро размораживается и размораживается в водяной ванне при температуре 37 ° C, добавляя 5 мл питательной среды, смешанной равномерно. Центрифугирование в течение 5 минут в условиях 1000 RPM, удаление очищающей жидкости, добавление4 - 6млКультивирующая среда после дутья равномерно. Затем добавьте всю клеточную суспензию в бутылку для культивирования на ночь (или добавьте клеточную суспензию)В чашке 6 см)И культивировать ночевку. На следующий день поменяйте жидкость и проверьте плотность клеток.

II.Клеточная транскрипцияЕсли плотность клеток достигает80% - 90%, можно проводить культуру передачи.

а)Для клеток, прикрепленных к стенке, передача может ссылаться на следующие методы:

1. Выбросить культуру верхней очистки и промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, который не содержит ионов кальция и магния.

2. Плюс1 - -2 мл пищеварительного раствора (0.25% Trypsin - 0,53 мм EDTA) переваривается в бутылке для культивирования и помещается в инкубатор 37°C1-2 минутыЗатем под микроскопом наблюдайте за пищеварением клеток, если большая часть клеток округлится и выпадает, быстро возвращайте консоль, постучите несколько раз в бутылку для культивирования и добавьтеСвыше 5 млсодержащий10% Сыворотка.Культурная среда прекращает пищеварение.

3. Аккуратно вдувайте клетки, высасывайте после отсоса, центрифугируйте 8 - 10 минут в условиях 1000 RPM, выбрасывайте очищающую жидкость, добавьте 1 - 2 мл питательной жидкости и выдувайте равномерно.

4. По5 - 6мл / бутылка добавьте питательную жидкость, чтобы разделить клеточную суспензию на новое содержание в соотношении 1: 25 - 6МЛ питательной жидкости в новой чашке или в бутылке.

b)),дляподвеснойКлетки, передачи могут ссылаться на следующие методы:

Метод 1: Сбор клеток,Центробежные 8 - 10 минут в условиях 1000RPM, сбрасывайте очищающую жидкость, добавьте 1 - 2 мл питательной жидкости и выдувайте ее равномерно, клеточную суспензию в новую чашку или бутылку, содержащую 8 мл питательной среды в пропорции от 1: 2 до 1: 5.

Метод 2: можно выбрать половину способа обмена жидкости, после того, как половина питательной среды будет выброшена, оставшиеся клетки будут подвешены, клеточная суспензия нажимаетСоотношение от 1: 2 до 1: 3 делится на новую чашку с 8 мл питательной среды или в бутылку.

ПС:Если клиент получает2 мл трубчатых клеток, после получения клетки, с 75% алкоголя распыляет всю трубку для дезинфекции и помещает в ультрачистый стол или сейф, строгая стерильная работа; Перенесите клетки трубки в бутылку T25 или6Cm чашка Петри, добавить5ml Левая и правая питательные среды смешиваются, помещаются в инкубатор на ночь после культивирования, чтобы увидеть плотность клеток: если плотность не превышает80%, обмен жидкости продолжает культивироваться, в зависимости от ситуации передачи или замораживания. Если плотность превышает80%, может быть проведена прямая передача (метод там же).

III.Клеточная заморозка:（ПРИМЕЧАНИЕ: Метод замораживания клеток без сывороточного замораживания см. в номере нашего отдела:С7001)

1、Клетки растут, чтобы покрыть бутылку.При 80% площади выбрасывайте питательную жидкость из бутылки с культурой 25cm2 и промывайте клетки PBS один раз;

2、добавитьПищеварительная жидкость около 1 мл в бутылку для культивирования, наблюдение под перевернутым микроскопом, после того, как клетка отступает, чтобы добавить питательную жидкость, чтобы прекратить пищеварение, мягко вдувать клетку, чтобы она выпала, а затем переместить суспензию в 15 мл центробежной трубки, 1000 rpm центрифуга 5 мин;

3、Перевешивать суспензионные клетки с соответствующим количеством замороженной жидкости и помещать их в криогенные трубки;

4、Сначала поместите клеточную трубку замерзания- 20°C 1.5h, затем переместите его в - 80°C