Протогенные клетки крыс

Протогенные клетки крысМетод передачи:

I. Пищеварение стенных клеток

Высасывайте или выливайте старые питательные вещества из бутылки.

Добавьте около 1 мл пищеварительного раствора (смешанного с EDTA), чтобы слегка встряхнуть питательную бутылку, так что клетки основания бутылки погружаются в раствор.

3. Через 2 - 5 минут после переваривания поместите культурную бутылку под микроскоп для наблюдения и обнаружили, что клетки, прикрепленные к оригинальной стенке, постепенно становятся круглыми, а когда они еще не дрейфуют, они выбрасывают пищеварительную жидкость и добавляют питательную жидкость, чтобы прекратить пищеварение.

4. Используйте соломинку, чтобы сдуть стенные клетки в суспензию, соответственно, в две - три другие бутылки для культивирования, поместите в инкубатор 37°C, чтобы продолжить культивирование. На следующий день наблюдался рост стенок.

II. Передача суспензионных клеток

1 Прямая передача

1) После того, как суспензионные клетки медленно оседают на дне бутылки, верхняя очистка высасывает 1 / 2 - 2 / 3.

2) После вдувания соломинкой, чтобы сформировать клеточную суспензию, соответственно, в две - три другие бутылки для культивирования, помещенные в инкубатор 37°C для культивирования.

2. центробежный метод передачи

1) Перенесите клетку вместе с питательным раствором в центрифужную трубку, центрифужную 800 - 1000 rpm, 5 минут.

2) Удалите верхнюю очистку, добавьте новую питательную жидкость в центробежную трубку, дуйте соломинкой, чтобы сформировать клеточную суспензию.

3) Введите клеточную суспензию в две - три другие бутылки для культивирования и культивируйте в инкубаторе 37°C.

Протогенные клетки крысПять распространенных ошибок в воспитании

Ошибка 1:Маленькие протоклетки размораживаются в водяной ванне в течение некоторого времени.

Исправление1: Протогенные клетки очень чувствительны к процессу оттаивания, поэтому важно поместить флакон в водяную ванну с температурой 37°C и держать и мягко вращаться, пока содержимое не разморозится. Затем бутылку следует немедленно вынуть из водяной бани и перенести на стерильный пульт. Убедитесь, что ваша питательная бутылка готова к размораживанию, чтобы ее можно было сразу же использовать для вакцинации клеток и поместить в инкубатор.

Ошибка 2:Прямая центрифуга после размораживания флакона

Исправление 2:Мы не рекомендуем центробежные клетки после размораживания, потому что центробежные процедуры более вредны, чем небольшие остатки DMSO. Помните, что на следующий день после восстановления протоклеток замените питательную среду, чтобы удалить любые остатки DMSO.

Ошибка 3:Позволяет протоклеткам становиться слишком интегрированными.

Исправление 3:При росте до 100 слияний протоклетки могут стареть. Помните, что протоклетки не 100 чистых, поэтому важно минимизировать рост загрязняющих клеток. Мы рекомендуем, чтобы, когда клетки достигают 90 - 95 - процентного слияния, они передавали культуры протоклеток.

Ошибка 4:Первичные клетки могут быть легко заморожены.

Исправление 4:Обычно мы не рекомендуем повторно замораживать протоклетки, потому что это может способствовать старению клеток и / или привести к функциональным изменениям. Протогенные клетки очень чувствительны, и повторное замораживание может привести к гибели или повреждению клеток.

Ошибка 5:Клетки могут размножаться бесконечно.

Исправление 5:В отличие от клеточной линии, протоклетки обладают ограниченной способностью к амплификации. Мы рекомендуем проводить эксперименты с протоклетками как можно раньше, чтобы предотвратить генетический дрейф. Кроме того, если вы используете тип клеток с затрудненной добавленной стоимостью, вы должны внимательно следить за морфологией клеток, потому что небольшое количество смешанных клеток (например, фибробластов) может расти в больших количествах со временем, чтобы стать основной клеткой.