Малые глиальные клетки человеческого нерва

Вся продукция компании предназначена только для научных экспериментов и не используется вне других научных экспериментов!

Малые глии человеческого нерва отделяются от мозговой ткани; Мозг делится на два полушария, кору головного мозга.(Серое вещество) покрывает большую часть каждого полушария мозга, где сосредоточены клетки нейронов. Внутри находится белое вещество, состоящее из нервных волокон или миелиновой оболочки. Каждое полушарие имеет три поверхности: внешнюю (около 1 / 3 всей коры), внутреннюю и нижнюю (2 / 3 площади); На поверхности полушария есть много канав или трещин различной глубины, поднятия между канавами или трещинами, которые значительно увеличивают площадь поверхности мозга; На внешней стороне головного мозга есть важные канавы, трещины на внешней стороне мозга, трещины на верхней подушке и центральные канавы. Из - за границы трещин коры головного мозга разделены на четыре части: лобную, теменную, височную и затылочную. Мелкие глиальные клетки являются нейроглиями, эквивалентными макрофагам в мозге и спинном мозге, и являются основной иммунной линией в центральной нервной системе (ЦНС). Мелкие глии составляют около 20% глиальных клеток в мозге, которые постоянно очищают поврежденные нервы, бляшки и инфекционные вещества в центральной нервной системе. Многочисленные клинические и теологические исследования показывают, что активированные микроглии играют важную роль в патогенезе нейродегенеративных заболеваний, таких как болезнь Паркинсона, рассеянный склероз и болезнь Альцгеймера. Но слишком много активированных или неконтролируемых микроглиальных клеток может вызвать нейротоксичность. Они являются важными источниками воспалительных факторов и окислительного стресса, таких как фактор некроза опухоли (TNF), оксид азота, белого мезонина и других нейротоксичных веществ. Основные функции нейроглиальных клеток: (1) нейроглии появляются в процессе перехода от раннего развития мозга к зрелой стадии; Когда процедурные клетки умирают или когда центральная нервная система повреждена или патологически повреждена во время развития мозга, глия может быть макрофагом мозга; Глиоциты могут экспрессировать антигены при экспрессии CD - 4 - положительных Т - клеток в комплексе совместимости тканей класса II, могут выполнять макрофаги, опосредованные Fc, и делиться антигенами с кроветворными клетками и макрофагами.
Описание методологии:

Небольшая глия человеческого нерва, отделенная лабораторией компании, использует ферментный метод пищеварения в сочетании с дифференциальным методом стенки, через несколько дней после потери питательной среды в питательной среде, собранной сотрясением в качалке, чтобы собрать отслоенные клетки, общее количество клеток околоПять на десять? Cells / Бутылка.
Контроль качества:

Лаборатория компании выделила микроглию человекаCD11b иммунофлуоресцентная идентификация, чистота до 90% и не содержит ВИЧ - 1, HBV, HCV, микоплазма, бактерий, дрожжей и грибков и так далее.

Среда содержащийFBS、 Растительные добавки, пенициллин, Streptomycin и т.д.

Частота обмена жидкости КаждыйСмена жидкости через 2 - 3 дня.

Характеристика роста Стена

Клеточная форма Челнок, многоугольник

передаточная характеристика Принадлежит к конечным дифференцированным клеткам; Принадлежит к группе непродуктивных клеток.

Пищеварительная жидкость Лидия (12мм)

Условия культивирования Газовая фаза: воздух,95%； CO2, 5%

Подготовка

1. Подготовка лабораторного оборудования: подготовка стерильной посуды, емкости для культивирования, пипетки для переноса жидкости, центробежных труб, хирургических инструментов и т.д., а также проведение высоковольтной стерилизации или другой соответствующей дезинфекционной обработки.

2. Подготовка реагентов: Приготовьте или купите подходящие питательные среды, пищеварительные ферменты (например, коллагеназы и т. Д.), сыворотку плодного крупного рогатого скота, двойную резистентность и другие реагенты, чтобы обеспечить их стерильность и в течение срока действия.

Подготовка источника подопытных животных или тканей: выбор подходящего животного в соответствии с потребностями эксперимента и проведение соответствующей анестезии или казни, получение необходимой ткани; Или взять ткань из существующей базы образцов тканей.

Отбор и обработка материалов

1. Экстракция материалов: в стерильных условиях быстро удалить целевую ткань, минимизировать повреждение ткани и удалить избыточные жиры, соединительные ткани и другие нецелевые ткани.

2. Очистка: извлеченную ткань несколько раз промывают предварительно охлажденной стерильной PBS для удаления крови и примесей.

3. Вырезание: Стричь ткань на мелкие кусочки примерно 1 - 2 мм³ для последующего переваривания.

Клеточное разделение

1. Пищеварение: измельченные тканевые блоки помещаются в центрифужную трубку, содержащую соответствующее количество пищеварительных ферментов, и в течение некоторого времени перевариваются в термостате или инкубаторе при температуре 37°C. В течение этого периода можно мягко встряхнуть центробежную трубку, чтобы пищеварение было более равномерным.

Прекращение пищеварения: когда большая часть тканевых блоков переваривается в одноклеточную суспензию или мелкие клеточные скопления, добавьте сывороточную питательную среду, чтобы прекратить пищеварение.

Фильтруйте и центрифугируйте: фильтруйте клеточную суспензию клеточным ситом, удаляйте несваренные фрагменты ткани, а затем центрифугируйте фильтр с соответствующей скоростью вращения, чтобы собрать осадки клеток.

Клеточное наблюдение и обнаружение

1. Ежедневное наблюдение: ежедневно с помощью инвертированного микроскопа наблюдаются морфология, состояние роста, плотность клеток и т.д., регистрируются изменения в клетках, такие как обнаружение клеточного загрязнения или аномалий, своевременно принимаются соответствующие меры.
2. Количество клеток и определение их жизнеспособности: при необходимости клетки могут быть подсчитаны и проверены на жизнеспособность с помощью таких методов, как синее крашение, чтобы понять рост и состояние здоровья клеток.

I. Отбор материалов и отделение

1. Быстрая эксплуатация

- Организмы должны быть обработаны сразу после забора материала, чтобы избежать длительного воздействия комнатной температуры или питательной среды.

- Промыть ткани стерильным PBS или физиологическим раствором для удаления крови, примесей.

2. Выбор пищеварительных ферментов

- Выбор пищеварительных ферментов в соответствии с типом ткани, чтобы избежать чрезмерного переваривания, которое приводит к повреждению клеток.

- Время пищеварения требует строгого контроля (обычно 10 - 30 минут), и состояние диссоциации клетки можно наблюдать через микроскоп.

II. Оптимизация условий воспитания

1. Выбор среды

- Используя питательные среды, содержащие сыворотку или специфические факторы роста (например, DMEM, RPMI 1640 и т. Д.), некоторые клетки должны добавлять инсулин, EGF и т. Д.

- Избегайте частой смены марок или партий питательных сред и уменьшайте адаптивный стресс клеток.

2. Стены и преемственность

- Протогенные клетки имеют слабую способность прикрепляться к стенке и могут потребовать упаковки чашки Петри (например, коллаген, полилизин).

- Плотность передачи рекомендуется контролировать на 70% - 80%, а чрезмерное слияние может привести к подавлению контакта и дифференциации.

III. Контроль за загрязнением

1. Асептическая операция

- Полная работа на ультрачистой станции, использование одноразовых расходных материалов, чтобы избежать перекрестного загрязнения.

- В питательную среду может быть добавлен двойной антивирус, но долгосрочное использование может повлиять на активность клеток.

2. Обнаружение микоплазмов

- Регулярно выявлять загрязнение микоплазмом (например, методом PCR), после загрязнения необходимо своевременно выбрасывать клетки.

IV. Мониторинг состояния

1. Ежедневные наблюдения

- Ежедневно проверять клеточную форму, плотность и цвет питательной среды, своевременно заменять питательную среду (как правило, менять жидкость каждые 2 - 3 дня).

- Аномальные формы (например, округление клеток, увеличение фрагментов) могут указывать на загрязнение или недоедание.

2. Передача и замораживание

- Протогенная клетка имеет ограниченное количество делений (обычно 5 - 10 поколений) и требует своевременного замораживания ранних поколений вторичных клеток.

- Замораживающие жидкости рекомендуется использовать сыворотку DMSO + (или специальную замороженную питательную среду), которая сохраняется жидким азотом после охлаждения градиента.