Детектор вируса гепатита у мышей флуоресцентная дозировка RT - PCR

[Название продукта]Количественная флуоресценция с помощью зонда вируса гепатита у мышей Набор реактивов RT - PCR

ИмяА.Вирус гепатита мыши (MHV) ПробегRT-PCRKit

[Спецификация упаковки]50 раз / коробка

【Предполагаемое использование)Вирус гепатита у мышей(MouseHepatitisVirus, MHV) - это РНК - вирус, который присутствует в крови и внутренних органах, особенно в печени и почках, а также в фекалиях, очень заразен для молодых мышей, гепатит мышей является инфекционным заболеванием, вызванным MHV. Токсичные мыши распространены, но при нормальных обстоятельствах в основном являются неактивными инфекциями, которые могут стать смертельными заболеваниями, в основном гепатитом и энцефалитом, и поэтому быстрая и точная идентификация вируса гепатита мышей играет важную роль в профилактике и карантине заболевания. Данный продукт представляет собой специальный набор реагентов для обнаружения вируса гепатита у мышей, разработанный на основе технологии RT - PCR для флуоресцентной количественной оценки методом зонда, который имеет следующие характеристики:

1. Открытый как можно скорее, пользователь должен предоставить только образец РНК шаблона.

2. Искатели и зонды оптимизированы и обладают высокой чувствительностью.

3. Предоставление положительного контроля облегчает дифференциацию ложноотрицательных образцов.

Высокая специфичность, экстракт был спроектирован в соответствии с высоко консервативной зоной вируса гепатита мышей и не имел перекрестных реакций с РНК других вирусов.

Продукта достаточно для 50 флуоресцентных количественных реакций RT - PCR зондовой системы 20 мкл.

6.Данный продукт может использоваться только в научных целях.

[Спецификация и состав]

【Транспорт и хранение)Криогенный транспорт,20°C Сохранить, срок хранения 12 месяцев.

【Собственный реактив)образец РНа.

Детектор вируса гепатита у мышей флуоресцентная дозировка RT - PCR[Способ использования]I. Образец разреженной стандартной кривой (Например, 6 10 - кратное разбавление 10E2 - 10E6 копий / мкл) Из - за очень высокой концентрации стандартного продукта следующие операции разбавления должны проводиться в отдельной области и не должны загрязнять образец или другие компоненты настоящего комплекта. Чтобы повысить стабильность продукта и избежать распространения инфекционных патогенов, этот продукт не предоставляет живых образцов для положительного контроля, а только неинфекционные фрагменты ДНК для положительного контроля.

1. Маркировать 6 центрифуг, соответственно, 6, 5, 4, 3, 2, 1.

2. Добавьте раствор для разбавления 45 мкл флуоресцентного PCR специального шаблона с головкой с сердечником (предпочтительно с головкой с сердечником, то же самое ниже).

Добавьте 5 мкл L1×10E7 копий / мкл положительного контроля в трубку № 6 (поставляется в комплекте), получите полное сотрясение в течение 1 минуты и получите 1 × 10E6 копий / мкл стандартной кривой образца. Поставьте лед для использования.

Смените головку, добавьте 5 мкл L1×10E6 копий / мкл положительного контраста в трубку 5 (полученную в результате предыдущего разбавления), получите полное сотрясение в течение 1 минуты и получите 1 × 10E5 копий / мкл стандартной кривой образца. Поставьте лед для использования.

Смените головку пистолета, добавьте 5 мкл L1×10E5 копий / мкл положительного контраста в трубку 4 (полученную в результате предыдущего разбавления), получите полное сотрясение в течение 1 минуты и получите стандартную кривую 1 × 10E4 копии / мкл образца. Поставьте лед для использования.

Повторите вышеприведенную операцию до получения образца стандартной кривой с шестью степенями разбавления. На лед.

II. Образец РНКПодготовка

7. Если есть N образцов, лучше установить N + 2 экстракции, один из которых является ПК (образец готов к положительному контролю) и один NC (образец готов к отрицательному контролю). Можно использовать 10 - миллилитровый положительный 10000 - кратный разбавленный раствор плюс определенное количество воды, чтобы сделать общий объем таким же, как требуется для каждой подготовки, и использовать его в качестве ПК. Кроме того, вода используется в качестве NC.

Восемь. Образцы РНК очищаются по собственному выбору, и этот набор совместим с большинством наборов для извлечения вирусной РНК на рынкеА.

триРеакция ProbeqRT - PCR(Система 20 мкл, в комнате подготовки образцов.)

9. Если проводится количественный анализ и делается только 1 повтор, маркируется N + 9 труб PCR, из которых N + 2 используются для образца N + 2, полученного на предыдущем этапе, 1 для отрицательного контроля PCR (шаблон с водой) и 6 для стандартной кривой. Если качественный анализ проводится и делается только 1 повтор, маркируется N + 4 трубки PCR, из которых N + 2 используется для образца N + 2, полученного на предыдущем этапе, 1 для отрицательного контроля PCR (шаблон с водой) и 1 для положительного контроля PCR (шаблон с положительным контрольным раствором в трубке № 4). Ниже приводится только количественный анализ для описания действий,

10. Добавить ингредиенты в маркировочную трубку, нажав на следующую таблицу (эта таблица содержит только одно повторение. Положительный контраст устанавливается только после того, как трубка образца и отрицательный контроль установлены, а положительный контрольный образец добавляется после того, как все трубки закрываются крышкой для хранения)

11.Закройте крышку и садитесь на борт, нажмите следующие параметры.qRT-ПЦР:

IV: Обработка данных

12. Если этот комплект используется для количественного тестирования, то для построения стандартной кривой используется значение log положительной контрольной концентрации в качестве горизонтальной оси, а значение Ct - вертикальной оси. Значение log концентрации РНК в пробах выводится из стандартной кривой на основе значения Ct в пробах, подлежащих измерению.

13. Если этот набор используется для качественного теста, который определяет только положительный или отрицательный, отрицательный контрольный Ct должен быть больше или равен 40. Положительный контраст должен иметь флуоресцентный логарифмический рост, типичную кривую усиления, значение Ct должно быть меньше или равно 30. Обращение с обследованными образцами является отрицательным, если Ct превышает или равен 40, и положительным, если он меньше или равен 35. Если между 35 и 40, повторите это один раз. Значение Ct в повторных экспериментах было отрицательным, если оно было больше или равно 40, и положительным, если оно было меньше 35.