Микроскопические эндотелиальные клетки легких человека

Вся продукция компании предназначена только для научных экспериментов и не используется вне других научных экспериментов!

Выделение внутренней оболочки микрокровеносных сосудов из легочной ткани человека; Легкие - это органы дыхания организма, расположенные в грудной клетке, каждый слева и справа, покрытые сердцем. Легкие имеют доли, два слева и три справа, всего пять листьев. Легочная транслегочная система (относится к трахее, бронхам и т. Д.) соединена с горлом, носом, поэтому горло называется воротами легких, нос - внелегочный трюк. Микроскопические эндотелиальные клетки активно участвуют в ряде физиологических и воспалительных реакций, включая регенерацию, развитие и заживление ран. Клетки имеют форму челнока или многоугольника и расположены в виде булыжника или брусчатки после образования одного слоя. Микроваскулярные эндотелиальные клетки легких образуют полуселективный барьер, который имеет большое значение для газообмена легких, регулируя поток жидкостей и растворимых веществ между кровью и интерстициалами легких.

Описание методологии:

Лабораторно разделенная внутренняя оболочка микрокровеносных сосудов легких человека была подготовлена с использованием гистокластического метода и в сочетании с фильтрацией культивирования специальных сред для эндотелиальных клеток с общим количеством клеток около 5×10 ⁵cells / бутылок.

Контроль качества:

Лабораторно выделенный эндотелий микрокровеносных сосудов человека был идентифицирован иммунофлуоресценцией CD31 с чистотой до 90% и не содержит ВИЧ - 1, HBV, HCV, микоплазмов, бактерий, дрожжей и грибков.

Условия пакетированияPLL (0,1 мг / мл) или желатин (0,1%)

СредаСодержит FBS, добавки для роста, Penicillin, Streptomycin и т.д.

Частота обмена жидкостиМеняйте жидкость каждые 2 - 3 дня.

Характеристика ростаСтена

Клеточная формаЭндотелиальные образцы

передаточная характеристикаМожно передать 2 - 3 поколения.

Пищеварительная жидкость0,25%

Подготовка

1. Подготовка лабораторного оборудования: подготовка стерильной посуды, емкости для культивирования, пипетки для переноса жидкости, центробежных труб, хирургических инструментов и т.д., а также проведение высоковольтной стерилизации или другой соответствующей дезинфекционной обработки.

2. Подготовка реагентов: Приготовьте или купите подходящие питательные среды, пищеварительные ферменты (например, коллагеназы и т. Д.), сыворотку плодного крупного рогатого скота, двойную резистентность и другие реагенты, чтобы обеспечить их стерильность и в течение срока действия.

Подготовка источника подопытных животных или тканей: выбор подходящего животного в соответствии с потребностями эксперимента и проведение соответствующей анестезии или казни, получение необходимой ткани; Или взять ткань из существующей базы образцов тканей.

Отбор и обработка материалов

1. Экстракция материалов: в стерильных условиях быстро удалить целевую ткань, минимизировать повреждение ткани и удалить избыточные жиры, соединительные ткани и другие нецелевые ткани.

2. Очистка: извлеченную ткань несколько раз промывают предварительно охлажденной стерильной PBS для удаления крови и примесей.

3. Вырезание: Стричь ткань на мелкие кусочки примерно 1 - 2 мм³ для последующего переваривания.

Клеточное разделение

1. Пищеварение: измельченные тканевые блоки помещаются в центрифужную трубку, содержащую соответствующее количество пищеварительных ферментов, и в течение некоторого времени перевариваются в термостате или инкубаторе при температуре 37°C. В течение этого периода можно мягко встряхнуть центробежную трубку, чтобы пищеварение было более равномерным.

Прекращение пищеварения: когда большая часть тканевых блоков переваривается в одноклеточную суспензию или мелкие клеточные скопления, добавьте сывороточную питательную среду, чтобы прекратить пищеварение.

Фильтруйте и центрифугируйте: фильтруйте клеточную суспензию клеточным ситом, удаляйте несваренные фрагменты ткани, а затем центрифугируйте фильтр с соответствующей скоростью вращения, чтобы собрать осадки клеток.

Клеточное наблюдение и обнаружение

1. Ежедневное наблюдение: ежедневно с помощью инвертированного микроскопа наблюдаются морфология, состояние роста, плотность клеток и т.д., регистрируются изменения в клетках, такие как обнаружение клеточного загрязнения или аномалий, своевременно принимаются соответствующие меры.
2. Количество клеток и определение их жизнеспособности: при необходимости клетки могут быть подсчитаны и проверены на жизнеспособность с помощью таких методов, как синее крашение, чтобы понять рост и состояние здоровья клеток.

I. Отбор материалов и отделение

1. Быстрая эксплуатация

- Организмы должны быть обработаны сразу после забора материала, чтобы избежать длительного воздействия комнатной температуры или питательной среды.

- Промыть ткани стерильным PBS или физиологическим раствором для удаления крови, примесей.

2. Выбор пищеварительных ферментов

- Выбор пищеварительных ферментов в соответствии с типом ткани, чтобы избежать чрезмерного переваривания, которое приводит к повреждению клеток.

- Время пищеварения требует строгого контроля (обычно 10 - 30 минут), и состояние диссоциации клетки можно наблюдать через микроскоп.

II. Оптимизация условий воспитания

1. Выбор среды

- Используя питательные среды, содержащие сыворотку или специфические факторы роста (например, DMEM, RPMI 1640 и т. Д.), некоторые клетки должны добавлять инсулин, EGF и т. Д.

- Избегайте частой смены марок или партий питательных сред и уменьшайте адаптивный стресс клеток.

2. Стены и преемственность

- Протогенные клетки имеют слабую способность прикрепляться к стенке и могут потребовать упаковки чашки Петри (например, коллаген, полилизин).

- Плотность передачи рекомендуется контролировать на 70% - 80%, а чрезмерное слияние может привести к подавлению контакта и дифференциации.

III. Контроль за загрязнением

1. Асептическая операция

- Полная работа на ультрачистой станции, использование одноразовых расходных материалов, чтобы избежать перекрестного загрязнения.

- В питательную среду может быть добавлен двойной антивирус, но долгосрочное использование может повлиять на активность клеток.

2. Обнаружение микоплазмов

- Регулярно выявлять загрязнение микоплазмом (например, методом PCR), после загрязнения необходимо своевременно выбрасывать клетки.

IV. Мониторинг состояния

1. Ежедневные наблюдения

- Ежедневно проверять клеточную форму, плотность и цвет питательной среды, своевременно заменять питательную среду (как правило, менять жидкость каждые 2 - 3 дня).

- Аномальные формы (например, округление клеток, увеличение фрагментов) могут указывать на загрязнение или недоедание.

2. Передача и замораживание

- Протогенная клетка имеет ограниченное количество делений (обычно 5 - 10 поколений) и требует своевременного замораживания ранних поколений вторичных клеток.

- Замораживающие жидкости рекомендуется использовать сыворотку DMSO + (или специальную замороженную питательную среду), которая сохраняется жидким азотом после охлаждения градиента.