Человеческая сетчатка, микрокровеносные эндотелиальные клетки

Вся продукция компании предназначена только для научных экспериментов и не используется вне других научных экспериментов!

- разделение эндотелиальной коры сетчатки глаза человека; Ретинит находится внутри стенки глазного яблока и представляет собой прозрачную пленку. Ретиноид состоит из пигментного эпителия и сенсорного слоя сетчатки, которые при патологии могут быть разделены между двумя слоями, называемыми отсоединением сетчатки. Пигментный эпителий тесно связан с мембраной и состоит из пигментных эпителиальных клеток, которые поддерживают и питают фоторецепторные клетки, затемняют, охлаждают, а также регенерируют и восстанавливают. Гистологическая сетчатка делится на10 слой, из внешней внутренней оболочки: пигментный эпителиальный слой, зрительный конус, зрительный стержневой клеточный слой, внешняя мембрана, наружный гранулированный слой, наружный сплетенный слой, внутренний гранулированный слой, сплетенный слой, нейронный клеточный слой, слой нервных волокон, внутренняя оболочка. Внутренний слой сетчатки представляет собой тонкую пленку, покрытую внутренней поверхностью кровеносной мембраны, которая обладает светочувствительным эффектом; На задней части носа находится сосок зрительного нерва. Чувствительный слой сетчатки состоит из трех нейронов. Нейроны - это слой зрительных клеток, специализирующийся на светочувствительности, который включает в себя конические и стержневые клетки. Клетки зрительного стержня находятся в основном на сетчатке, расположенной далеко от центральной вогнутости, в то время как клетки зрительного конуса находятся в наибольшей степени в центральной вогнутости. Второй слой, называемый двойными клетками, имеет от 10 до сотен зрительных клеток, связанных с одной нейронной клеткой через двойные клетки, которые отвечают за связь. Третий слой называется клеточным слоем, который специализируется на передаче. Ретинит представляет собой тонкую, но очень сложную структуру, которая прикрепляется к задней стенке глазного яблока и передает нервные волокна от импульса рецептора сетчатки через поверхность сетчатки, достигая выхода через зрительный нерв. Разрешение сетчатки неравномерно, и в области желтого пятна оно сильно различается. Это однослойные плоские эпителиальные клетки, составляющие кровеносные полости, которые производят и выделяют биологически активные вещества, которые играют важную роль в поддержании тонуса кровеносных сосудов, регулировании кровяного давления, антитромбозе и т. Д. Они имеют важное патофизиологическое значение в патогенезе сосудистых заболеваний сетчатки глаза. Поскольку эндотелиальные клетки, полученные из различных тканей и органов, имеют разные свойства, в мозге и сетчатке эти эндотелиальные клетки имеют функцию внутреннего барьера и играют важную роль в регулировании физиологического состояния кровеносных сосудов, высвобождении активных веществ в кровеносных сосудах и формировании новорожденных кровеносных сосудов, экстракорпоральная сепарационная культура RCEC имеет клиническое значение для изучения патофизиологических механизмов развития сосудистых заболеваний сетчатки и ранней профилактики и лечения заболеваний.
Описание методологии:

Лаборатория компании выделила внутреннюю оболочку сетчатки глаза человека с использованием коллагеназы.- Нейтральный метод комбинированного пищеварения Dan - лейкоэнзима в сочетании с градиентом плотности центрифугирования и, наконец, с помощью скрининга культур эндотелиальных клеток, общее количество клеток около 5×10? Cells / Бутылка.
Контроль качества:

Лаборатория компании выделила эндотелиальные менструации сетчатки человекаCD31 иммунофлуоресцентная идентификация, чистота до 90% и не содержит ВИЧ - 1, HBV, HCV, микоплазма, бактерий, дрожжей и грибков и т.д.

Условия пакетирования PLL（0.1mg/ml）， желатин (0,1%)

Среда содержащийFBS、 Растительные добавки, пенициллин, Streptomycin и т.д.

Частота обмена жидкости КаждыйСмена жидкости через 2 - 3 дня.

Характеристика роста Стена

Клеточная форма Эндотелиальные образцы

передаточная характеристика А2 - 3 поколения

Пищеварительная жидкость 0.25% ИИпротеаза

Условия культивирования Газовая фаза: воздух,95%； CO2, 5%

Подготовка

1. Подготовка лабораторного оборудования: подготовка стерильной посуды, емкости для культивирования, пипетки для переноса жидкости, центробежных труб, хирургических инструментов и т.д., а также проведение высоковольтной стерилизации или другой соответствующей дезинфекционной обработки.

2. Подготовка реагентов: Приготовьте или купите подходящие питательные среды, пищеварительные ферменты (например, коллагеназы и т. Д.), сыворотку плодного крупного рогатого скота, двойную резистентность и другие реагенты, чтобы обеспечить их стерильность и в течение срока действия.

Подготовка источника подопытных животных или тканей: выбор подходящего животного в соответствии с потребностями эксперимента и проведение соответствующей анестезии или казни, получение необходимой ткани; Или взять ткань из существующей базы образцов тканей.

Отбор и обработка материалов

1. Экстракция материалов: в стерильных условиях быстро удалить целевую ткань, минимизировать повреждение ткани и удалить избыточные жиры, соединительные ткани и другие нецелевые ткани.

2. Очистка: извлеченную ткань несколько раз промывают предварительно охлажденной стерильной PBS для удаления крови и примесей.

3. Вырезание: Стричь ткань на мелкие кусочки примерно 1 - 2 мм³ для последующего переваривания.

Клеточное разделение

1. Пищеварение: измельченные тканевые блоки помещаются в центрифужную трубку, содержащую соответствующее количество пищеварительных ферментов, и в течение некоторого времени перевариваются в термостатическом качалке или инкубаторе при температуре 37°C. В течение этого периода можно мягко встряхнуть центробежную трубку, чтобы пищеварение было более равномерным.

Прекращение пищеварения: когда большая часть тканевых блоков переваривается в одноклеточную суспензию или мелкие клеточные скопления, добавьте сывороточную питательную среду, чтобы прекратить пищеварение.

Фильтруйте и центрифугируйте: фильтруйте клеточную суспензию клеточным ситом, удаляйте несваренные фрагменты ткани, а затем центрифугируйте фильтр с соответствующей скоростью вращения, чтобы собрать осадки клеток.

Клеточное наблюдение и обнаружение

1. Ежедневное наблюдение: ежедневно с помощью инвертированного микроскопа наблюдаются морфология, состояние роста, плотность клеток и т.д., регистрируются изменения в клетках, такие как обнаружение клеточного загрязнения или аномалий, своевременно принимаются соответствующие меры.
2. Количество клеток и определение их жизнеспособности: при необходимости клетки могут быть подсчитаны и проверены на жизнеспособность с помощью таких методов, как синее крашение, чтобы понять рост и состояние здоровья клеток.

I. Отбор материалов и отделение

1. Быстрая эксплуатация

- Организмы должны быть обработаны сразу после забора материала, чтобы избежать длительного воздействия комнатной температуры или питательной среды.

- Промыть ткани стерильным PBS или физиологическим раствором для удаления крови, примесей.

2. Выбор пищеварительных ферментов

- Выбор пищеварительных ферментов в соответствии с типом ткани, чтобы избежать чрезмерного переваривания, которое приводит к повреждению клеток.

- Время пищеварения требует строгого контроля (обычно 10 - 30 минут), и состояние диссоциации клетки можно наблюдать через микроскоп.

II. Оптимизация условий воспитания

1. Выбор среды

- Используя питательные среды, содержащие сыворотку или специфические факторы роста (например, DMEM, RPMI 1640 и т. Д.), некоторые клетки должны добавлять инсулин, EGF и т. Д.

- Избегайте частой смены марок или партий питательных сред и уменьшайте адаптивный стресс клеток.

2. Стены и преемственность

- Протогенные клетки имеют слабую способность прикрепляться к стенке и могут потребовать упаковки чашки Петри (например, коллаген, полилизин).

- Плотность передачи рекомендуется контролировать на 70% - 80%, а чрезмерное слияние может привести к подавлению контакта и дифференциации.

III. Контроль за загрязнением

1. Асептическая операция

- Полная работа на ультрачистой станции, использование одноразовых расходных материалов, чтобы избежать перекрестного загрязнения.

- В питательную среду может быть добавлен двойной антивирус, но долгосрочное использование может повлиять на активность клеток.

2. Обнаружение микоплазмов

- Регулярно выявлять загрязнение микоплазмом (например, методом PCR), после загрязнения необходимо своевременно выбрасывать клетки.

IV. Мониторинг состояния

1. Ежедневные наблюдения

- Ежедневно проверять клеточную форму, плотность и цвет питательной среды, своевременно заменять питательную среду (как правило, менять жидкость каждые 2 - 3 дня).

- Аномальные формы (например, округление клеток, увеличение фрагментов) могут указывать на загрязнение или недоедание.

2. Передача и замораживание

- Протогенная клетка имеет ограниченное количество делений (обычно 5 - 10 поколений) и требует своевременного замораживания ранних поколений вторичных клеток.

- Замораживающие жидкости рекомендуется использовать сыворотку DMSO + (или специальную замороженную питательную среду), которая сохраняется жидким азотом после охлаждения градиента.