Клеточная среда OAR - L1

Описание товара:

Клеточная среда OAR - L1Описание продукта

Специальная среда для клеток OAR - L1 была тщательно оптимизирована командой, и после длительных испытаний этот продукт поддерживает рост клеток OAR - L1.

Данный продукт уже содержитРазличные ингредиенты, необходимые для роста клеток OAR - L1, без добавления каких - либо компонентов, могут быть непосредственно использованы для культивирования клеток OAR - L1.

Основные компоненты продукции

Базовая среда DMEM 445 мл

Сыворотка крупного рогатого скота 50 мл

P / S Плесень su - стрептоплесень su 5 мл

Перевозка и хранение

Перевозка: перевозка при низких температурах в инкубаторах, содержащих биологические мешки со льдом

保存方法：2°C - 8°C, чтобы избежать света, сохранить 2 месяца; - 20°C, избегая света, хранить 6 месяцев.

контроль качества

Внимание:

Только для научных целей.

Некоторые компоненты в системе культивирования являются вредными для здоровья человека веществами, и, пожалуйста, не прикасайтесь к жидкостям системы культивирования и остаткам жидкости с системой культивирования внутри контейнера с открытой кожей; Эта часть вредных веществ имеет низкую концентрацию и опасность, и в случае контакта ее можно немедленно промыть проточной водой.

Этапы клеточной культуры:

I. Подготовка питательных сред и условий замораживания культур:

1) Подготовка среды DMEM - H (с добавлением NaHCO3 1.5 г / л), 90%; Сыворотка плода крупного рогатого скота, 10%. В зависимости от экспериментальных потребностей можно также выбрать взвешенные питательные среды для роста 293Т - клеток.

2) условия культивирования: газовая фаза: воздух, 95%; Углекислыйгаз, 5%. Температура: 37 градусов Цельсия, влажность инкубатора 70% - 80%.

3) Замороженная жидкость: 90% питательной среды, 10% DMSO, в настоящее время используется в существующем распределении. Хранение жидкого азота.

II. Клеточная обработка:

1) Реанимационные клетки: замороженные трубки, содержащие 1 мл клеточной суспензии, быстро размораживаются и размораживаются в водяной ванне при температуре 37°C, добавляя 4 мл питательной среды, смешанной равномерно. Центрифугирование в течение 4 минут в условиях 1000RPM, удаление очищающей жидкости, добавление 1 - 2мл питательной среды после дутья. Затем все клеточные суспензии добавляются в бутылку для культивирования на ночь (или клеточная суспензия добавляется в чашку Петри 10 см, добавляется около 8 мл питательной среды, культивируется на ночь). На следующий день поменяйте жидкость и проверьте плотность клеток.

2) Клеточная транскрипция: если плотность клеток достигает 80% - 90%, можно проводить культуру транскрипции.

Для клеток, прикрепленных к стенке, транскрипция может ссылаться на следующие методы:

1. Выбросить культуру верхней очистки и промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, который не содержит ионов кальция и магния.

2. Добавьте 2 мл пищеварительного раствора (0,25% Trypsin - 0.53 мм EDTA) в питательную бутылку, поместите в инкубатор 37°C для переваривания в течение 1 - 2 минут, затем под микроскопом наблюдайте пищеварение клетки, если большая часть клетки округлится и выпадает, быстро возьмите операционный стол, постучите несколько раз в питательную бутылку и добавьте небольшое количество питательной среды, чтобы прекратить пищеварение.

3. Нажмите 6 - 8 мл / бутылку, чтобы добавить питательную среду, мягко выровнять и высосать, в условиях 1000RPM центрифугировать в течение 4 минут, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после дутья равномерно.

Разделите клеточную суспензию в новую чашку или бутылку, содержащую 8 мл питательной среды, в пропорции от 1: 2 до 1: 5.

3) Замораживание клеток: Когда клетки растут в хорошем состоянии, может проводиться замораживание клеток. Когда прикрепленные к стенке клетки замораживаются, после удаления питательной среды добавляется небольшое количество, после того, как клетка становится круглой, добавляется около 1 мл сывороточной среды после добавления в трубку замораживания, а затем добавляется 10% DMSO для замораживания.

Как заморозить клетки?

Метод замораживания и хранения 1: охлаждающая трубка помещается при температуре 4°C 30 ~ 60 минут → (20°C 30 минут *) → - 80°C 16 ~ 18 часов (или на ночь) → резервуар жидкого азота vaporphase для долгосрочного хранения.

Второй способ замораживания и хранения: охлаждающая трубка помещается в программируемый охладитель с установленной процедурой ниже 1 - 3 °C в минуту до - 80 °C, а затем помещается в резервуар для жидкого азота vapor phase для долгосрочного хранения. 20°C не может превышать 1 час, чтобы предотвратить слишком большие кристаллы льда, вызывая массовую гибель клеток, или пропустить этот шаг непосредственно в холодильник - 80°C, но выживаемость немного ниже.

Продукция, которую компания продает:

1) подогревать питательную среду в водяной ванне при температуре 37°C; Приготовьте стерильную центробежную трубку 15 мл и добавьте 8 мл подогреваемой среды.

2) Вытащите замороженные клетки из резервуара с жидким азотом и быстро поместите их в водяную ванну с температурой 37°C для восстановления температуры (можно подготовить чистую чашку, заполненную водой с температурой 37°C, после удаления трубки для замораживания клеток быстро поместите в чашку, а затем постепенно переместите в водяную ванну). Аккуратно встряхните замороженную трубку, так что клетка может оттаять в течение 1 - 2 мин, так что клетка может как можно скорее пройти через уязвимый температурный диапазон (- 5 ~ 0°C). Обратите внимание, что отверстие трубы замораживания не может не попасть в воду, чтобы избежать загрязнения.

3) Протрите замороженную трубку 75% спиртом, а затем поместите в сверхчистый стол, внутреннюю клетку трубки переместите в готовую центробежную трубку, мягко вдувайте жидкость, так что клетки равномерно рассеиваются, снижая концентрацию DMSO, чтобы избежать образования пузырьков при дутье. Стены труб промывают свежими питательными средами 2 раза, все они переносятся в центробежные трубы.

4) 800rpm центрифуга 5min, отбросить, добавить свежие питательные среды, вдувать в клеточную суспензию.

5) Перенесите клеточную суспензию в клеточную бутылку T25, добавьте соответствующее количество питательной среды, мягко встряхните клеточную бутылку, чтобы клетки были распределены равномерно и помещены в термос для культивирования.

6) Наблюдайте за ростом клеток, прикрепленных к стенкам, на следующий день и заменяйте свежие питательные среды для удаления мертвых клеток. Продолжайте культивировать, ожидая, что клетки вырастут до 80 - 90% слияния, когда нормальная передача. Клетки, которые, как правило, только что восстановились, должны пройти 2 - 3 передачи, прежде чем они смогут провести последующие эксперименты после восстановления клеточной активности.