Специальные питательные среды для протоплевральных фибробластов крыс

Описание товара:

Тщательно оптимизированный командой, после длительных испытаний, этот продукт может поддерживать хорошее состояние роста протоплевральных фибробластов крыс.

Этот продукт уже содержит различные компоненты, необходимые для роста волокнистых клеток протоплевральной железы крыс, без добавления каких - либо компонентов, которые могут быть использованы непосредственно для культивирования волокнистых клеток протоплевральной железы крыс.

Основные компоненты продукции

Перевозка и хранение

Транспорт:Перевозка при низких температурах в инкубаторах, содержащих биологические мешки со льдом

保存方法:: Сохранить в соответствии с соответствующими условиями хранения в течение 12 месяцев, настроить питательную среду от 2°C до 8°C, сохранить в течение 2 месяцев;

Контроль качества

Внимание:

Только для научных целей.

Некоторые компоненты в системе культивирования являются вредными для здоровья человека веществами, и, пожалуйста, не прикасайтесь к жидкостям системы культивирования и остаткам жидкости с системой культивирования внутри контейнера с открытой кожей; Эта часть вредных веществ имеет низкую концентрацию и опасность, и в случае контакта ее можно немедленно промыть проточной водой.

Этапы клеточной культуры:

I. Подготовка питательных сред и условий замораживания культур:

1) Подготовка среды DMEM - H (с добавлением NaHCO3 1.5 г / л), 90%; Сыворотка плода крупного рогатого скота, 10%. В зависимости от экспериментальных потребностей можно также выбрать взвешенные питательные среды для роста 293Т - клеток.

2) условия культивирования: газовая фаза: воздух, 95%; Углекислыйгаз, 5%. Температура: 37 градусов Цельсия, влажность инкубатора 70% - 80%.

3) Замороженная жидкость: 90% питательной среды, 10% DMSO, в настоящее время используется в существующем распределении. Хранение жидкого азота.

II. Клеточная обработка:

1) Реанимационные клетки: замороженные трубки, содержащие 1 мл клеточной суспензии, быстро размораживаются и размораживаются в водяной ванне при температуре 37°C, добавляя 4 мл питательной среды, смешанной равномерно. Центрифугирование в течение 4 минут в условиях 1000RPM, удаление очищающей жидкости, добавление 1 - 2мл питательной среды после дутья. Затем все клеточные суспензии добавляются в бутылку для культивирования на ночь (или клеточная суспензия добавляется в чашку Петри 10 см, добавляется около 8 мл питательной среды, культивируется на ночь). На следующий день поменяйте жидкость и проверьте плотность клеток.

2) Клеточная транскрипция: если плотность клеток достигает 80% - 90%, можно проводить культуру транскрипции.

Для клеток, прикрепленных к стенке, транскрипция может ссылаться на следующие методы:

1. Выбросить культуру верхней очистки и промыть клетки 1 - 2 раза с помощью PBS, который не содержит ионов кальция и магния.

2. Добавьте 2 мл пищеварительного раствора (0,25% Trypsin - 0.53 мм EDTA) в питательную бутылку, поместите в инкубатор 37°C для переваривания в течение 1 - 2 минут, затем под микроскопом наблюдайте пищеварение клетки, если большая часть клетки округлится и выпадает, быстро возьмите операционный стол, постучите несколько раз в питательную бутылку и добавьте небольшое количество питательной среды, чтобы прекратить пищеварение.

3. Нажмите 6 - 8 мл / бутылку, чтобы добавить питательную среду, мягко выровнять и высосать, в условиях 1000RPM центрифугировать в течение 4 минут, отбросить очищающую жидкость, добавить 1 - 2 мл питательной жидкости после дутья равномерно.

Разделите клеточную суспензию в новую чашку или бутылку, содержащую 8 мл питательной среды, в пропорции от 1: 2 до 1: 5.

3) Замораживание клеток: Когда клетки растут в хорошем состоянии, может проводиться замораживание клеток. Когда прикрепленные к стенке клетки замораживаются, после удаления питательной среды добавляется небольшое количество, после того, как клетка становится круглой, добавляется около 1 мл сывороточной среды после добавления в трубку замораживания, а затем добавляется 10% DMSO для замораживания.

Как заморозить клетки?

Метод замораживания и хранения 1: охлаждающая трубка помещается при температуре 4°C 30 ~ 60 минут → (20°C 30 минут *) → - 80°C 16 ~ 18 часов (или на ночь) → резервуар жидкого азота vaporphase для долгосрочного хранения.

Второй способ замораживания и хранения: охлаждающая трубка помещается в программируемый охладитель с установленной процедурой ниже 1 - 3 °C в минуту до - 80 °C, а затем помещается в резервуар для жидкого азота vapor phase для долгосрочного хранения. 20°C не может превышать 1 час, чтобы предотвратить слишком большие кристаллы льда, вызывая массовую гибель клеток, или пропустить этот шаг непосредственно в холодильник - 80°C, но выживаемость немного ниже.

Продукция, которую компания продает:

1) подогревать питательную среду в водяной ванне при температуре 37°C; Приготовьте стерильную центробежную трубку 15 мл и добавьте 8 мл подогреваемой среды.

2) Вытащите замороженные клетки из резервуара с жидким азотом и быстро поместите их в водяную ванну с температурой 37°C для восстановления температуры (можно подготовить чистую чашку, заполненную водой с температурой 37°C, после удаления трубки для замораживания клеток быстро поместите в чашку, а затем постепенно переместите в водяную ванну). Аккуратно встряхните замороженную трубку, так что клетка может оттаять в течение 1 - 2 мин, так что клетка может как можно скорее пройти через уязвимый температурный диапазон (- 5 ~ 0°C). Обратите внимание, что отверстие трубы замораживания не может не попасть в воду, чтобы избежать загрязнения.

3) Протрите замороженную трубку 75% спиртом, а затем поместите в сверхчистый стол, внутреннюю клетку трубки переместите в готовую центробежную трубку, мягко вдувайте жидкость, так что клетки равномерно рассеиваются, снижая концентрацию DMSO, чтобы избежать образования пузырьков при дутье. Стены труб промывают свежими питательными средами 2 раза, все они переносятся в центробежные трубы.

4) 800rpm центрифуга 5min, отбросить, добавить свежие питательные среды, вдувать в клеточную суспензию.

5) Перенесите клеточную суспензию в клеточную бутылку T25, добавьте соответствующее количество питательной среды, мягко встряхните клеточную бутылку, чтобы клетки были распределены равномерно и помещены в термос для культивирования.

6) Наблюдайте за ростом клеток, прикрепленных к стенкам, на следующий день и заменяйте свежие питательные среды для удаления мертвых клеток. Продолжайте культивировать, ожидая, что клетки вырастут до 80 - 90% слияния, когда нормальная передача. Клетки, которые, как правило, только что восстановились, должны пройти 2 - 3 передачи, прежде чем они смогут провести последующие эксперименты после восстановления клеточной активности.