ES Целенаправленные технические услуги

I. СОДЕРЖАНИЕES Целенаправленные технические услугиТехнические определения и основные принципы

ES Технология стрельбыЭто метод редактирования генов, основанный на гомологической рекомбинации эмбриональных стволовых клеток (Embryonic Stem Cells, ES), который обеспечивает точную модификацию, такую как генетическое выбивание (KO), условное выбивание (CKO), генетическое вбивание (KI) и точечная мутация (PM), путем интеграции привязки экзогенной ДНК к определенному местоположению генома. Его основные принципы включают:

1. Механизмы гомологической реструктуризацииА.

• Дизайн содержитгомологическая рука(гомология с геном - мишенью) носитель вставляет экзогенную последовательность (например, ген - маркер скрининга) в целевой участок с помощью гомогенной рекомбинации.

2. Отрицательная система фильтрацииА.

• метка положительного фильтра(Например, Neo ᵣ): Вставьте гомологическую область и отфильтруйте успешно реорганизованные клетки ES.

• Маркер отрицательного фильтра(Например, HSV - tk / DTA): Расположенный на внешней стороне гомогенной руки, устраняет случайные вставленные клетки.

3. Эмбриональная универсальность стволовых клетокА.

• После модификации ES - клетки вводятся в кисту и развиваются в химерных мышей (F0), получая стабильную генетическую модель через передачу репродуктивной линии.

Техническое позиционирование:: Стрельба по мишеням является золотым стандартом эпохи до CRISPR, особенно дляРедактор больших фрагментов(> 10 кб) иСложная генетическая модификация(Например, условное удаление).

II.ES Целенаправленные технические услугиСтандартизация рабочих процессов и технологические инновации

(i) Традиционный ES - таргетинг процесс (7 - 12 месяцев)

Анализ ключевых шаговА.

1. Конструкция носителяА.

• Длина гомогенной руки обычно составляет 3 - 5 кб, для вставки больших фрагментов требуется носитель BAC.

2. ES - клеточная селекцияА.

• Часто используемые продукты: 129S6 / SvEvTac (Высокая рекомбинантная эффективность), C57BL / 6N (Чистый фон).

3. химеризацияА.

• Степень имплантации кисты после инъекции составляет около 20 - 70%, и ее необходимо интуитивно просеивать с помощью маркеров шерсти (например, альбиносов - хозяев).

(ii) Технологические инновации: таргетирование ЭПС - клеток

ЭПС - клетки(Extended Pluripotent Stem Cells), описанный нашими учеными в 2017 году, имеет следующие преимущества:

1. Повышение эффективностиА.

• Эффективность стрельбы до традиционных ES - клеток.В 10 - 100 разА.

2. Сокращение циклаА.

• Мозаика приобретается шаг за шагом, исключая 3 месяца передачи семейства.

3. Повышенная универсальностьА.

• Одноклеточная инъекция кисты может генерировать 99,99% химеры.