Модели животных ZFNs

ДоговариваемыйОбновление на03/04

Модель

Природа производителя: Производители

Категория продукта

Место происхождения

Онлайн Консультация

Обзор

Зоологическая модель ZFNs: Зоологическая модель фермента цинковых нуклеиновых кислот (ZFNs) представляет собой экспериментальную модель животных, построенную с использованием технологии редактирования генов фермента цинковых нуклеиновых кислот. Цинклинлинуклеаза состоит из слияния цинкового белка (ZFP) и нуклеотидной кислоты (FokI), который может специфически связывать целевую последовательность ДНК, в то время как нуклеаза отвечает за резку ДНК, тем самым вводя двухцепочечный разрыв на определенном генетическом участке, вызывая механизм восстановления клеток для достижения генетического выщелачивания, постукивания или мутации.

Подробности о продукте

I. СОДЕРЖАНИЕМодели животных ZFNsТехнические принципы и основные механизмы

ZFNs являетсяПервое поколение программируемых инструментов редактирования геновЧерез интеграциюОбласть связывания ДНК(Цинковый белок) иОбласть вырезания ДНК(нуклеаза FokI) Реализация целевого редактирования:

Структурные области цинковых белковА.

от30 - 34 аминокислотных дубликатаСостав, каждый модуль проходит12 - й и 13 - й битные переменные остатки (RVDs)Определение конкретных оснований:

Тип RVD	Идентификация оснований	Специфичность
НИ	А	высокий
НГ	Т	высокий
HD	С	высокий
НН	Г/А	Средний

Индивидуальное распознавание цинковых пальцев3 bpПоследовательное соединение 3 - 6 мишеней9-18 bpПоследовательность.

Поле резания FokIА.

нужноДуализацияЧтобы активировать функцию резки → ZFNs должен быть спроектирован в паре (левая / правая рука), а место резки расположено между точками соединения двух рук (интервал 5 - 7 bp).

Механизм редактированияА.

Двухцепочечный разрыв (DSB) → путь восстановления активации клетки:

Негомологичное конечное соединение (NHEJ):: Случайная вставка / отсутствие (Indels), что приводит к выбиванию генов.
Гетерогенное направленное восстановление (HDR):: Требуются шаблоны восстановления внешних источников (например, ssODN) для достижения точечных мутаций или вставки генов.

Технологический прорыв: Шоу реализованоЦелевое редактирование генома млекопитающих(2005) Начало эры точного редактирования генов.

II.Модели животных ZFNsОптимизация процессов и технологий

(i) Стандартизированные оперативные этапы

(ii) Оптимизация ключевых технических параметров

шаг	Основные операции	Инновационная оптимизация
Проектирование мишеней	Избегайте зон с высоким повторением / метилированием, интервалы 5 - 7 bp	Прогнозирование программного обеспечения (ZiFit) для повышения эффективности интеграции
Цинковая сборка	Модульный метод последовательного соединенияА.

Последовательное соединение 3 - 6 единиц цинкового пальца
Клонирование Golden Gate (BsaI / BsmBI) - 6 дней для завершения сборки с коэффициентом успеха > 80%.
Аноситель выраженияДвойной инициирующий субвектор (CMV / T7), поддерживающий синтез мРНК и экспрессию белка. Подходит для нескольких видов (зебры, мыши, свиньи).
АСпособ доставкиМикроскопическая инъекция яйцеклеток ZFNs mRNA
Транскрипция соматических клеток + трансплантация ядра (крупные животные)
АРемонт улучшенСовместный шаблон ssODN + ингибитор NHEJ (SCR7) для повышения эффективности HDR в 3 раза.

Примеры применения различных видов и преимущества моделей

(i) Типичные виды и модели болезней

Виды	Гены - мишени	Модель болезни	Эффективность / форма	Ценность исследований
Зебра	золотой	Альбинизм	95% Дефицит пигмента F0	Функциональный скрининг генов развития
Мыши	Раг2/ИЛ2рг	Модель иммунодефицита	Двойное генетическое удаление, антропогенная трансплантационная платформа	Исследования по лечению опухолей
свинья	ГГТА1	Модель трансплантации гетерогенных устройств Guan	Удаление антигена альфа - Галя для снижения гиперострого отторжения	Развитие антропогенных органов
Плодовые мухи	желтый	Мутация цвета тела	Коэффициент мутации репродуктивной линии 5,7% (модель животного)	Консервативная проверка функции генов

(2) Незаменимый сценарий применения

Региональный редактор GCА.

Без ограничений последовательности PAM можно ориентироваться на области, которые не могут быть отредактированы CRISPR / Cas9.

Низкий показатель промахаА.

Процент промаха в терапевтическом редактировании < 0,1% (CRISPR 1 - 10%).

Модели больших животныхА.

У свиней и крупного рогатого скота иммуногенность ниже, чем у CRISPR.

Похожий продукт рекомендовать